KJ 201906 动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测 胶体金免疫层析法

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1、附件6动物源性食品中喹诺酮类物质的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201906)1　范围本方法规定了动物源性食品中喹诺酮类物质的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳、猪肉、猪肝、猪肾中洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、氟甲喹、噁喹酸残留的快速测定。2　原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的喹诺酮类物质与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化，通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中喹诺酮类物质进行定

2、性判定。3　试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1　试剂3.1.1　乙腈。3.1.2　甲酸。3.1.3　分散固相萃取剂I：分别称取硫酸镁18g、醋酸钠4.5g放于研钵中研碎。3.1.4　分散固相萃取剂II：分别称取硫酸镁27g、N-丙基乙二胺（PSA）4.5g放于研钵中研碎。3.1.5　甲酸-乙腈溶液：98mL乙腈中加入2mL甲酸，混匀。3.1.6　甲醇。3.1.7　稀释液：脱脂奶粉︰水（1︰10）。3.2　参考物质喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表

3、1，纯度≥99%。表1喹诺酮类参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量序号中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量1洛美沙星Lomefloxacin98079-51-7C17H19F2N3O3351.352培氟沙星Pefloxacin70458-92-3C17H20FN3O3333.363氧氟沙星Ofloxacin82419-36-1C18H20FN3O4361.374诺氟沙星Norfloxacin70458-96-7C16H18FN3O3319.335达氟沙星Danofloxacin112398-08-0C19H

4、20FN3O3357.386二氟沙星Difloxacin5522-39-4C28H33N3F2449.587恩诺沙星Enrofloxacin93106-60-6C19H22FN3O3359.168环丙沙星Ciprofloxacin85721-33-1C17H18FN3O3331.139氟甲喹Flumequine42835-25-6C14H12FNO3261.2510噁喹酸OxolinicAcid14698-29-4C13H11NO5261.23注：或等同可溯源物质。1.1　标准溶液的配制3.3.1喹诺酮类物质标准储备液（1mg/mL）：分别

5、精密称取喹诺酮类参考物质（3.2）适量，置于50mL烧杯中，加入适量甲醇（3.1.6）超声溶解后，用甲醇转入10mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，配制成浓度为1mg/mL的喹诺酮标准储备液。-20℃避光保存，有效期6个月。3.3.2喹诺酮类物质标准中间液（1μg/mL）：分别吸取喹诺酮类标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL于100mL容量瓶中，用甲醇（3.1.6）稀释至刻度，摇匀，配制成浓度为1μg/mL的喹诺酮类标准中间液。1.2　材料1.2.1　金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。1.2.2　试剂条或检测卡。2　仪器和设备

6、2.1　移液器：100μL、200μL和1mL。2.2　涡旋混合器。2.3　离心机：转速≥4000r/min。2.4　电子天平：感量为0.01g。2.5　孵育器：可调节时间、温度，控温精度±1℃。2.6　读数仪。2.7　氮吹仪。2.8　环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%（采用孵育器与读数仪时可不要求环境温度）。3　分析步骤3.1　试样制备液体乳直接用于测定，猪肉、猪肝、猪肾用组织捣碎机等搅碎后备用。1.1　试样的提取5.2.1生乳、巴氏杀菌乳、灭菌乳分别吸取同等体积的液体乳样品与稀释液混合后为待测液。5.2.2猪肉、猪肝、猪肾准确称

7、取2.5±0.01g均质后的组织样品于15mL离心管中，加入5mL甲酸-乙腈溶液（3.1.5），涡旋混合1min，振荡5min，4000r/min离心5min。将上清液2mL转入10mL离心管中，分别加入0.6g分散固相萃取剂I(3.1.3)漩涡混合1min、再加入0.6g分散固相萃取剂II(3.1.4)后漩涡混合1min，静置分层后取1mL于10mL离心管中，于氮吹仪60℃吹干后用1mL样品稀释液溶解作为待测液。1.2　测定步骤5.3.1检测卡测定步骤5.3.1.1将检测卡平放入孵育器中。小心撕开检测卡的薄膜至指示线处，避免提起检测卡和海

8、绵。5.3.1.2用移液器取待测液（5.2）300μL，避免产生泡沫和气泡。竖直缓慢的滴加至检测卡两侧任意一侧的凹槽中，将粘箔重新粘好。5.3.1.3盖上孵育器的盖子，孵育器上的