KJ 201801 辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测 胶体金免疫层析法

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1、附件辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201801）1范围本方法规定了辣椒制品中苏丹红I的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于辣椒酱、辣椒油、辣椒粉等辣椒制品中苏丹红I的快速测定。2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苏丹红I与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苏丹红I进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1乙腈。3.1.

2、2无水硫酸镁。3.1.3正己烷。3.1.4二氯甲烷。3.1.5氢氧化钠。3.1.6氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.5）8g，用水溶解并稀释至100mL。3.1.7无水乙醇。3.1.8复溶液：将无水乙醇（3.1.7）与水按照体积比25:75混匀。3.2参考物质3.2.1苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。表1苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量苏丹红ISudanI842-07-9C16H1

3、2N2O248.28注：或等同可溯源物质。3.3标准溶液的配制—1——3.3.1苏丹红I标准储备液（1mg/mL）：精密称取苏丹红I标准品（3.2.1）适量，置于10mL容量瓶中，加入适量乙腈（3.1.1）超声溶解后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL的苏丹红Ⅰ标准储备液。﹣20℃避光保存，有效期6个月。3.3.2苏丹红I标准中间液（1μg/mL）：精密量取苏丹红I标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准中间液。3.4

4、材料3.4.1固相萃取柱：CNWPoly-seryMIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL），或相当者。3.4.2苏丹红I胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为辣椒酱、辣椒油、辣椒粉。3.4.2.1金标微孔。3.4.2.2试纸条或检测卡。4仪器和设备4.1移液器：200μL、1mL和5mL。4.2涡旋混合器。4.3离心机：转速≥4000r/min。4.4电子天平：感量为0.01g。4.5氮吹仪。4.6水浴锅。4.7环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%。5分析步骤5.1试样制备取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混

5、匀。5.2试样的提取5.2.1辣椒酱称取辣椒酱2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入0.5g无水硫酸镁（3.1.2）和5mL正己烷（3.1.3）提取液，涡旋振荡1min后，4000r/min离心5min。将上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。5.2.2辣椒油称取辣椒油5g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入8mL正己

6、烷（3.1.3）进行提取，涡旋振荡1min后，将上清液全部加入到固相萃取柱中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。——2—5.2.3辣椒粉称取辣椒粉3g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入8mL乙腈（3.1.1）提取，涡旋振荡1min后，6000r/min离心5min。转移上清液于10mL离心管中，吹干后加入2mL氢氧化钠溶液（3.1.6），涡旋混匀30s后置于80℃水

7、浴皂化5min。再加入2mL正己烷（3.1.3），涡旋萃取30s后，6000r/min离心5min，转移上清液于新的10mL离心管中，加入无水硫酸镁（3.1.2）0.5g，涡旋振荡30s后，4000r/min离心5min，转移上清液于10mL离心管中吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。5.3测定步骤5.3.1试纸条与金标微孔测定步骤吸取200μL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3～5min，将试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，

8、温育5～8min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。5.3.2检测卡与金标微孔测定步骤吸取200μL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3～5min，将金标