KJ 201910 食用油中苯并(a)芘的快速检测 胶体金免疫层析法

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1、附件10食用油中苯并(a)芘的快速检测胶体金免疫层析法(KJ201910)1范围本方法规定了食用油中苯并(a)芘的胶体金免疫层析快速检测方法。本方法适用于食用油中苯并(a)芘的快速测定。2原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苯并(a)芘经提取后与胶体金标记的特异性抗体结合,抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线(T线)上抗原的结合,从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线(C线)颜色深浅比较,对样品中苯并(a)芘进行定性判定。3试剂和材料除另有规定外,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的二级水。3.1试剂3.1.1正己烷:色谱纯。3.1.2乙腈:色谱纯。3.1.3二

2、甲基亚砜(DMSO)。3.1.4NaH2PO4•2H2O。3.1.5Na2HPO4•12H2O。3.1.6氯化钠。3.1.7吐温-20。3.1.8氢氧化钠溶液(2mol/L):称取80g氢氧化钠用水溶解,并定容至1L。3.1.9PBST溶液:称取0.2965gNaH2PO4•2H2O、2.9gNa2HPO4•12H2O、8.76g氯化钠与0.55g吐温-20用水溶解并定容至1L。3.2参考物质苯并(a)芘参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1,纯度均≥95%。—1—表1苯并(a)芘参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量中文名称英文名称C

3、AS登录号分子式相对分子质量苯并(a)芘Benzo(a)pyrene50-32-8C20H12252.32注:或等同可溯源物质。3.3标准溶液的配制苯并(a)芘标准储备液(0.1mg/mL):精密称取适量苯并(a)芘标准品(3.2),置于10mL容量瓶中,用乙腈(3.1.2)溶解并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为0.1mg/mL的苯并(a)芘标准储备液;或可直接购买苯并(a)芘标准储备液。0℃~5℃避光保存备用,有效期1年。3.4材料苯并(a)芘胶体金免疫层析试剂盒,适用基质为食用油。3.4.1金标微孔(含胶体金标记的特异性抗体)。3.4.2试纸条或检测卡。4仪器和设备4.1移液器:100µL、

4、1mL、5mL和10mL。4.2涡旋混合器。4.3离心机:转速≥4000r/min。4.4电子天平:感量为0.01g。4.5氮吹仪或空气吹干仪(带温度控制)。5分析步骤5.1试样制备取适量有代表性样品充分混匀。5.2试样提取和净化除脂称取10g油样于离心管中,加入5mL正己烷(3.1.1)和15mLDMSO(3.1.3)并混合均匀。漩涡振荡2min,然后4000r/min离心2min。弃去上层正己烷层。加入5mL正己烷(3.1.1),漩涡振荡30s,然后4000r/min离心30s。弃去上层正己烷层。加入10mL氢氧化钠溶液(2mol/L)(3.1.8)和15mL正己烷(3.1.1),漩涡振

5、荡30s,然后4000r/min离心30s。吸取上层正己烷层于15mL离心管,4000r/min离心2min。取全部正己烷层于氮吹管中,50℃氮吹或空气吹10min,吹干后加入200μLDMSO(3.1.3)复溶,混合均匀,此为待测液。5.3测定步骤打开试纸筒,取出所需数量的红色反应微孔(取出微孔后,立即盖好桶盖,以防受潮)。往微孔中加入200μL的PBST溶液,再加入50μL待测液,上下抽吸5~10次至微孔试剂混合均匀,室温(20℃~25℃)反应7min。将已做好标记的试纸条插入至上述红色微孔中,使样品垫充分进—2—入样品中,并计时7min。从微孔中取出试纸条,弃去试纸条下端的样品垫,进行

6、结果判定。5.4质控试验每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。5.4.1空白试验称取空白试样,按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。5.4.2加标质控试验准确称取空白试样(精确至0.01g)置于玻璃试剂瓶中,加入一定体积的苯并(a)芘标准储备液(0.1mg/mL)(3.3.1),使试样中苯并(a)芘浓度为10μg/kg,按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。6结果判定方式由于长时间放置会引起质控线(C线)与检测线(T线)颜色的变化,需在规定时间内进行结果判定。试纸条与检测卡如图1所示。结果判定也可根据产品说明书进行。6.1读数仪测定结果通过读数仪对结果进行判读,根据不同厂家仪器规定进行判

7、读。无效:质控线(C线)不显色,无论检测线(T线)是否显色,均表示实验结果无效。阳性:若检测结果显示“+”(阳性),表示试样中含有待测组分且其含量大于等于方法检出限。阴性:若检测结果显示“-”(阴性),表示试样中不含待测组分或其含量低于方法检出限。6.2目视判定通过对比质控线(C线)和检测线(T线)的颜色深浅进行结果判定。无效:质控线(C线)不显色,无论检测线(T线)是否显色,均表示实验结果无效。阳性:质控线

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