液体乳中三聚氰胺的快速检测,胶体金免疫层析法.doc

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1、液体乳中三聚氰胺的快速检测,胶体金免疫层析法　　附件7　　液体乳中三聚氰胺的快速检测　　胶体金免疫层析法　　(KJ201907)　　1范围　　本方法规定了液体乳中三聚氰胺的胶体金免疫层析快速检测方法。　　本方法适用于巴氏杀菌乳、灭菌乳、调制乳和发酵乳中三聚氰胺的快速测定。　　2原理　　本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的三聚氰胺与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和试纸条或检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中三聚氰胺进行定性判定。　　3

2、试剂和材料　　除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水。　　3.1试剂　　3.1.1　　甲醇。　　3.1.2　　三羟甲基氨基甲烷（Tris）。　　3.1.3　　1mol/L盐酸：移取83mL浓盐酸，加入900mL水中，定容至1L。　　3.1.4　　甲醇水溶液：准确量取50mL甲醇和50mL水，混匀后备用。　　3.1.5　　稀释液：准确称取6.05gTris（3.1.2）和8.5g1mol/L盐酸（3.1.3），加水定容至1L，混匀后备用。　　3.2参考物质　　参考物质的中文名称、英文名称

3、、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度≥99%。　　表1三聚氰胺参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量　　中文名称　　英文名称　　CAS登录号　　分子式　　相对分子质量　　三聚氰胺　　Melamine　　108-78-1　　C3H6N6　　126.12　　注：或等同可溯源物质。　　3.3标准溶液的配制　　三聚氰胺标准储备液（1000μg/mL）：精密称取适量三聚氰胺标准品（3.2），置于10mL容量瓶中，用甲醇水溶液（3.1.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1000μg/mL的三

4、聚氰胺标准储备液；或可直接购三聚氰胺标准储备液。4℃避光保存备用，有效期3个月。　　3.4三聚氰胺胶体金免疫层析试剂盒　　3.4.1金标微孔（含胶体金标记的特异性抗体）。　　3.4.2试纸条或检测卡。　　4仪器和设备　　4.1移液器：200µL、1000µL和5mL。　　4.2涡旋混合器。　　4.3电子天平：感量为0.01g。　　4.4环境条件：温度15℃~35℃，湿度≤80%。　　5分析步骤　　5.1试样制备　　取适量有代表性样品充分混匀。　　5.2试样提取　　准确称取样品0.5g于离心管中，加入5mL稀释液（3.1

5、.5），涡旋混匀提取5min，即得待测液。　　注：试样提取过程可按照试剂盒说明书，不做限定。　　5.3测定步骤　　5.3.1试纸条与金标微孔测定步骤　　吸取150~200μL样品待测液于金标微孔（3.4.1）中，抽吸5~10次使混合均匀，不要有气泡，40℃温育3min，将检测试纸条（3.4.2）样品端垂直向下插入金标微孔中，40℃温育5min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。　　5.3.2检测卡测定步骤　　吸取150-200μL样品待测液于检测卡加样孔（3.4.2）中，室温反应3-5min，进行结果判定。　　5.4质

6、控试验　　每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。　　5.4.1空白试验　　称取空白试样，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。　　5.4.2加标质控试验　　准确称取空白试样100g（精确至0.01g）置于100mL玻璃溶液瓶中，加入250μL三聚氰胺标准溶液（1000μg/mL）（3.3），使试样中三聚氰胺浓度为2.5mg/kg，按照5.2和5.3步骤与样品同法操作。　　注：可参考标准品的说明书配置操作。　　6结果判定要求　　通过对比控制线（C线）和检测线（T线）的颜色深浅进行结果判定。目视结果判读如图1。　　6.

7、1无效　　控制线（C线）不显色，表明不正确操作或试纸条/检测卡无效。　　6.2阳性结果　　6.2.1消线法　　检测线（T线）不显色，控制线（C线）显色，表明样品中三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。　　6.2.2比色法　　检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色浅或几乎不显色，表明样品中三聚氰胺含量高于方法检测限，判定为阳性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。　　6.3阴性结果　　6.3.1消线法　　检测线（T线）、控制线（C线）均显色，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，

8、判定为阴性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。　　6.3.2比色法　　检测线（T线）颜色比控制线（C线）颜色深或者检测线（T线）颜色与控制线（C线）颜色相当，表明样品中三聚氰胺含量低于方法检测限，判定为阴性（如图1试纸条/检测卡目视判定示意图）。　　试纸条　　手持端　　C线　　T线　　样品端　　检测卡　　加样孔　　T线　　C线