基因诊断84111

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1、基因诊断GeneDiagnosis传统的疾病诊断：临床学诊断、辅助检查（影像学诊断、血清学诊断、病理学诊断）。基因诊断（genediagnosis）利用现代分子生物学的技术方法和理论，直接分析受检者某一基因的结构(DNA水平)及其功能(RNA水平，表达水平)是否正常，从而对人体状态和疾病作出诊断的方法。什么是基因诊断？DNA诊断RNA诊断基因诊断的特点高特异性高灵敏性早期诊断性应用的广泛性约2万个基因人类30亿对碱基(98％调控序列,2％信息序列)约20万种蛋白质基因组学蛋白质组学以基因组学为基础，从疾病和健康的角度考虑，人类的疾病

2、都直接或间接与基因有关，如所有的遗传病，都是由于基因结构异常或基因表达异常所引起的；有些疾病则是环境因素与遗传因素综合作用的结果，如吸烟引起肺癌。大片段突变-----多个碱基的改变(片段缺失,插入和重排等)点突变----单个碱基的改变（替换、缺失和插入等）基因变异的类型基因诊断的基本技术和方法核酸分子杂交技术点杂交DNA印迹RNA印迹聚合酶链反应(PCR)限制性片段长度多态性分析单链构象多态性分析核酸分子杂交(nucleicacidmolecularhybridization)利用碱基的互补原理，用已知碱基序列的单链核苷酸片段作为探

3、针检测样本中是否存在与其互补的同源核酸序列的方法，称为核酸分子杂交。原理：碱基互补配对原则杂交可以是：DNA/DNARNA/RNADNA/RNA探针(probe)一小段用同位素、生物素或荧光染料等标记的与待测DNA或RNA互补的核酸序列。探针应具有高度持异性、敏感性和稳定性。基本过程α-地中海贫血症的基因诊断α-地中海贫血症(α-mediterranean anemia)是由于α-珠蛋白基因的缺失或点突变而导致α-珠蛋白链合成障碍所引起的一组溶血性贫血。BamHIBamHIα2α1α210kb14kbprobe人类的α珠蛋白基因位于

4、第16号染色体短臂的α珠蛋白基因簇中，该基因簇包括2个重复的α基因（α2和α1）。α基因不同程度的缺失引起不同类型的α地中海贫血症。以α基因为探针，Southernblot方法检测αα/αααα/α-αα/--α-/----/--正常缺1缺2缺3缺414kb10kb限制性片段长度多态性分析（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）由于DNA变异产生新的酶切位点或原有的酶切位点消失，在用限制性核酸内切酶消化时产生不同长度或不同数量的片段。RLFP分析法×MstⅡ酶切位点5´3´正常基因5´

5、3´突变基因1.15kb1.35kb镰刀形细胞贫血症患者的RFLP分析0.2kb+﹣0.2kb1.15kb1.35kb正常人突变携带着患者镰状红细胞贫血患者基因组的限制性酶切分析单链构象多态性分析（single-strandconformationpolymorphism,SSCP）DNA的突变造成DNA片段中碱基序列不同，变性为单链后在中性聚丙烯酰胺凝胶中的构象不同（单链构象多态性），利用迁移率的差别可使各种序列不同的单链分离开来。PCR-SSCP分析原理示意图PCR-SSCP分析DNA序列测定(双脱氧末端终止法)左侧：正常；右侧

6、突变序列分析用于基因诊断研究