《(论文)_病毒潜伏膜蛋白介导一异源的调节_[全文]》

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1、EB病毒潜伏膜蛋白1介导c-Jun/JunB异源二聚体对cyciinD1的调节*宋鑫①陶永光①曾亮①杨静①唐发清①黎民敬②龚建平①吴乔®曹亚叶（①中南大学湘雅医学院肿瘤研究所，长沙41007&②LaboratoryofMoleci»arT«x?inologySAIC-Frederick,NationalCancerInstitute,Frederick,MD21702,USA;③羊中科技大学I司幼医学院分子医学中心，武汉430030;④厦门大学生命科学院细泡生物学与肿瘤细宛工程教育部重点实验室，厦门361005）摘要研究发现LMF1可介导c-Jun/JunB活性异源二聚体

2、的形成，在此基础上，利用建立的Tet-on系统调逵LKIP1表达的细胞系，采用间接免疫荧光法联合激光共聚焦荧光显微镜技术、Westernblot方法、荧光素酶活性检测、Super-EMSA方法和流式细胞术，探讨LMP1介导c-Jun/JunB异源二聚体对cyciinD1的调节功能.结果表明，LMP1介导的c-Jun/JunB异源二聚体可上调cychnDl启动子活性及其表达，并影响细胞周期的行进.关键词潜伏膜蛋白1c-JunJunB异源二聚体cyciinD1细胞周期我们最新的研究工作已经证实叫在鼻咽癌细胞中，EB病毒潜伏膜蛋白1（latentmembraneprotein,

3、LMP1）激活JNK,动态调控JunB和c・Jun表达及翻译后修饰，介导c-Jun/JunB新的活性异源二聚体形成.c-Jun/JunB异源二聚体作为API重要的转录因子，其功能性活化的重要证据是通过与靶基因启动子结合，反式激活靶基因转录，调控靶基因的表达,从而发挥细胞增殖、凋亡分化等生物学效应.因此,为了进一步探索c-Jun/JunB活性异源二聚体的作用,寻找其调控的靶基因至关重要.令人感兴趣的是，新近的文献研究，在c-Jun/JunB介导的信号传导通路和细胞周期G1/S期相关重要靶基因cyciinD1之间建立起新的直接的联系.利用人HeLa细胞系研究证实,c-Jun在

4、靶基因cyciinD1启动子上有两个API样结合位点用以激活cyciinD1启动子叫新近的研究表明,JunB和c・Jun为相互拮抗转录调节因子,JunB/c-Jun这一比例决定cyciinD1在早G1期的转录与细胞周期的平衡；在细胞周期过程2004-03-12收稿,2004-09-02收修改稿•国家重点基础研究发展规划（973计划X批准号：G199805120I）.国家自然科学基金（批准号：30300403.30100005.30000087）和国家杰出青年科学基金（批准号：39525022）孫助项目"联系人,E-mail:Ycao98@public.cs.hn.cnSC

5、IENCEINCHINASer.CLifeSciences中,JunB和eJun的磷酸化增强其转录活性，并调节JunB/c-Jun的动态平衡，最终调控cyclinD1启动子活性，影响其表达叫我们前期的研究工作已经证实，在mRNA水平上，用Atlas™HumancDNAexpressionarrayI(Clon-tech公司)检测人体正常鼻咽组织与鼻咽癌组织基因表达，发现鼻咽癌组织cyclinD1表达上调在蛋白质水平上，我们已初步证实cyclinD1在人体鼻咽癌组织异常过表达，表明可能与鼻咽癌的发病有关⑹;在由鼻咽柱状上皮单纯性增生/化生、异型增生/化生和鼻咽癌癌变多阶段过

6、程cyclinD1表达呈增高趋势,其中在异型增生/化生中呈“一过性增高“，提示cyclinD1蛋白过表达可能为鼻咽癌发生过程中的早期事件,异型增生/化生可能是鼻咽癌癌变多阶段的逐要“关卡“⑺进一步的研究工作表明，EB病毒LMP1通过其介导的NF-kB,AP-1信号传导途径及其之间的cross-tolkl89可能整合信号于细胞周駅重要调节因子cyclinDll，0J,从而参三嶷咽细範僧殖紊乱及凋亡失控I叫上述大童的•匸作基础擬示:cyclinD1很可能受EB病毒LMF1诱2龙形成的c-Jun/JunB异源二聚体的异常调控.我们在前期研究工作基础上⑴，进一步研究c-Jun

7、/JunB异源二聚体对细胞周期相关電要杷基因cyclinD1的调控作用.该分子机制的阐明.有助于从一个新的角度重新审视EB病毒LMP1功能性活化c-Jun/JunB异源二聚体的意义.1材料与方法1.1细胞株和培养条件Tet-on-LMPlHNE2鼻咽癌细胞系【⑶为本所构建的、LMP1表达受四环素衍生物强力霉素(doxycyc-line.Dox,Sigma公司)调控的鼻咽癌细胞系,LMP1被Dox诱导表达呈时间依赖性和剂量依赖性增强.该细胞培养条件：含15%小牛血清的RPMI1640(Sigma公司).379.5%CO2.并维持