人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书

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1、人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒说明书【产品名称】通用名称：人类EGFR基因突变荧光PCR检测试剂盒英文名称：Shuwen®HumanEGFRGeneMutationDetectionKitforReal-TimePCR【包装规格】7测试/盒【预期用途】EGFR是一种细胞膜表面的糖蛋白受体，具有酪氨酸激酶（TyrosineKinase，TK）活性，是原癌基因c-erbB-1（HER-1）的表达产物。EGFR的主要信号转导途径有：PI3K-PDK通路，RAS-RAF-MEK-ERK-MAPK通路，PLC-γ通路，JAK-STAT通路。通过这些途径，

2、将胞外信号转化为胞内信号，从而有效应对外界的信号刺激，调节细胞的生长、增殖、分化，抑制细胞的凋亡。EGFR异常调节通过多种机制促进细胞恶性转化，包括受体的过度表达、突变、生长因子-受体自分泌环的活化以及特定的磷酸酶失活，其中涉及肿瘤发生和进展的机制中最常见的是EGFR的基因突变和过度表达。EGFR基因位于7号染色体短臂7pl2-14区，由28个外显子组成。其突变主要发生在EGFR酪氨酸激酶的ATP结合位点的编码区（第18-20外显子），研究表明，EGFR酪氨酸激酶抑制剂（例如吉非替尼、厄洛替尼和埃可替尼等）疗效与EGFR基因的突变有密切的相关性。目前已经

3、报道大约有30种突变与吉非替尼的药物反应相关，主要是19外显子上的缺失突变和21外显子上的L858R的点突变。外显子19上747-750位氨基酸的大约20种缺失约占所有突变的45%，其中以两种delE746-A750(2235_2249del15和2236_2250del15)最为常见，占到外显子19缺失总数的75%；外显子21上L858R的点突变占所有突变的45%左右；外显子18的3种点突变（G719X）约占5%；外显子20的突变占1%左右。另外研究发现外显子20上的T790M突变与酪氨酸激酶抑制剂药物的耐药性相关。本试剂盒以肿瘤DNA为检测样本，提供

4、EGFR基因突变的定性检测。本试剂盒仅为临床医生肿瘤靶向治疗药物的选择提供参考，具体临床应用时须结合实际情况进行判断，不能以本试剂盒检测结果作为临床诊断的唯一依据。【检测原理】本试剂盒结合特异性引物和TaqMan探针技术，用实时荧光PCR方法检测DNA样品中的EGFR突变基因。利用特异性引物对突变靶序列进行扩增，同时阻滞野生型的扩增，通过TaqMan探针对扩增产物进行检测，使得突变基因得到扩增而野生型基本不扩增，从而达到高检测特异性和高灵敏度。【主要组成成分】本试剂盒具体包含组分如表1表1编号组分份数体积(µL)119-Del（1）检测反应液115021

5、9-Del（2）检测反应液11503S768I检测反应液1150420-Ins检测反应液11505T790M检测反应液11506L858R检测反应液11507L861Q检测反应液11508G719X检测反应液1150外控检测反应液1150r-Taq酶130阳性对照DNA1100无菌超纯水15005【储存条件及有效期】避光，-20℃以下保存，避免反复冻融(不要超过5次)，有效期6个月。【适用仪器】ABI7300，ABI7500，ABI7900，ABIStepOne，ABIStepOnePlus，Rotor-GeneQ【样本要求】本试剂盒可以检测从新鲜组织及

6、FFPE组织中提取的DNA，DNA质量及浓度影响检测的特异性和灵敏度。DNA的质量与样本保存时间、样本组成、DNA提取方法密切相关；而且所采集的临床样本中正常组织细胞的混杂程度也不同，因此对样本做如下要求：1、新鲜标本的制备过程中，术后标本取下后应立即放入-20℃以下冰箱中保存；石蜡包埋组织制备过程中，术后标本应在1个小时内放入10％中性缓冲福尔马林溶液中固定，用量应为组织块的4-20倍，固定时间应在6-48小时之间；2、新鲜组织样本，要确保含有肿瘤细胞大于1%，尽量减少正常组织、间质及坏死组织，推荐使用商业化试剂盒提取DNA(AXYGEN，QIAGEN

7、等公司产品)。提取的DNA用分光光度计检测DNA纯度，A260/A280在1.6-2.0之间，如果不能立即检测请置于-20℃保存。3、FFPE组织样本，要确保含有肿瘤细胞，尽量去除坏死组织及石蜡边缘，推荐使用商业化试剂盒提取DNA(QIAampDNAFFPETissueKit)。提取的DNA用分光光度计检测DNA纯度，A260/A280在1.6-2.0之间，如果不能立即检测请置于-20℃保存。FFPE组织样本保存年限尚未超过3年。4、样本切片规格要求为：横切面面积至少6mm×6mm，厚度10µm，3片，如果切片面积小请适当增加切片数。最终提取的DNA用1

8、00µL-200µL水溶解，分光光度计检测浓度后，稀释或浓缩成5-10ng/µL