人类EGFR基因突变检测试剂盒=北京驰明瑞生物

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1、人类EGFR基因突变检测试剂盒（荧光探针法）[产品名称]通用名称：人类EGFR基因突变检测试剂盒（荧光探针法）英文名称：DetectionKitforEGFRMutations(FluoresecenceProbing)[产品编号]BD0040[包装规格]10Tests[预期用途]DetectionKitforEGFRMutations(FluoresecenceProbing)采用荧光探针技术，适合于检测非小细胞肺癌病人血清或血浆、组织样本中的EGFR基因6种常见突变型，用于Iressa（易瑞沙）、Tarceva（特罗凯）等靶

2、向药物效果研究，为非小细胞肺癌的个体化治疗方案研究提供理论参照，不用于临床诊断与治疗。[检测原理]本检测试剂盒采用TaqMan-MGB探针技术检测6个突变位点，TaqMan-MGB探针的5’端标记有报告基团(Reporter,R)，如FAM、VIC等，3’端标记有非荧光淬灭基团(Quencher,Q)和MGB分子。非荧光淬灭基团(Non-FluorescentQuencher)本身不产生荧光，可以大大降低本底信号的强度；MGB分子可以更加稳定探针与模板的杂交、升高探针Tm值，使较短的探针同样能达到较高的Tm值，而短探针的荧光报告

3、基团和淬灭基团的距离更近，使得淬灭效果更好、荧光背景更低、信噪比更高。探针与模板不结合时，探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收，无荧光；探针与模板结合时，Taq酶的5’→3’外切酶活性水解探针，使R与Q分开，发出荧光。TaqMan-MGB探针法具有灵敏性高、特异性高等优点，由于不同波长的荧光基团对可供选择，使得在同一管内可进行多重PCR，降低成本、提高效率。[主要组成成分]试剂盒检测每个样本需要3个反应，包括19M1检测反应液（探针19del2235-2249、2236-2250）、19M2检测反应液（探针19del2240

4、-2251、2240-2257）、21M检测反应液（探针2573T＞G、2582T＞A），其信号由FAM、VIC指示。试剂盒组成见表1编号组成成分规格数量12×TaqMix1.2mL/支1﹡12ROXReferenceDye48μL/支1﹡23ROXReferenceDyeⅡ48μL/支1419M1检测反应液304μL/支1519M2检测反应液304μL/支1621M检测反应液304μL/支17阳性对照品20μL/支68阴性对照品20μL/支29产品说明书1﹡备注：1：适用于ABIPRISM7000/7700/7300和Step

5、OnePlusReal-TimePCR﹡System；2：适用于ABIPRISM7500/7500FastReal-TimePCRSystem、StratageneMx3000P。ThermalCyclerDiceRealTimeSystem、LightCycler、SmartCyclerⅡSystem等扩增仪不必使用ROX。[储存条件及有效期]本试剂盒中2×TaqMix酶、ROXReferenceDye(Ⅱ)储存于4℃，其他试剂储存于-20℃。有效期为6个月（请于有效期内使用）。[自备试剂]无RNase和DNase的枪头、PC

6、R96孔板或八联反应管。[适用仪器]ABIPRISM7000/7700/7300和StepOnePlusReal-TimePCRSystem等。[样本要求]可对以下样本进行检测：1、血清、血液、血浆DNA；2、组织标本包括新鲜、石蜡包埋组织切片、液氮冻存、酒精固定和RNAlater保存的各种手术样本；3、穿刺活检的各种方式保存的样本。DNA提取：推荐使用商业化的试剂盒提取人全基因组DNA，如QIAampDNABloodMiniKit等。需对提取的DNA洗脱液进行定量，20μL体系中，DNA模板通常在100ng以下。[检验方法]建

7、议在每次PCR反应中，每份样本和阳性对照、阴性对照共同分析1、扩增试剂准备从试剂盒中取出检测反应液、解冻，2000rpm离心10sec。2、加样a)、向每个反应孔中加入7.6μLPCR反应液，再加入10μL2×TaqMix酶、0.4μLROXReferenceDye（Ⅱ），亦可混匀分装。b）、加入2μLDNA模板。需要对DNA定量，本试剂盒检测范围为100ng以下。c）、离心PCR96孔板或八联管，使所加试剂聚集于管底。3、PCR扩增a)、将PCR反应板放入荧光定量PCR仪器中。b)、循环条件设置

8、00/7300Real-TimePCRSystem：95℃30sec；95℃5sec、60℃30～31sec（770030sec、7000/730031sec），40cyclesTM