肝功能检查指标的选择与评价ppt课件

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1、肝功能检查指标的选择与评价一、实验目的掌握：血清转氨酶、胆红素测定的方法和原理；熟悉：重氮试剂法测定血清胆红素的操作步骤；了解：血清转氨酶、胆红素测定的临床意义。ALT、AST测定测定方法：连续监测法、赖氏法连续监测法测定丙氨酸氨基转移酶基本原理：L-丙氨酸+α-酮戊二酸α-丙酮酸+L-谷氨酸α-丙酮酸+NADH乳酸+NAD+连续监测法测定天门冬氨酸氨基转移酶基本原理：L-天门冬氨酸+α-酮戊二酸草酰乙酸+L-谷氨酸草酰乙酸+NADH+H+L-苹果酸+NAD+连续监测法测定NADH被氧化为NAD+,可在340nm处连续监测到NADH被氧化引起吸光度

2、下降速率，该下降速率与ALT、AST活性呈正比。二实验原理ALTLDHASTMDH三、试剂与器材丙氨酸氨基转移酶试剂盒：R1:α-酮戊二酸、NADH、乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-丙氨酸、Tris缓冲液天冬氨酸氨基转移酶试剂盒：R1:α-酮戊二酸、NADH、苹果酸脱氢酶（MDH）、乳酸脱氢酶（LDH）R2：L-天门冬氨酸、Tris缓冲液四、操作步骤1.试剂准备：取10ml的R2，溶解一瓶R1，充分溶解后即为工作液。2.仪器准备：水浴锅调温37℃。紫外分光光度计，预热，波长340nm。2.按表操作：3.混匀，37℃水浴1min，于空白管校零，

3、精确读取1、2、3min吸光度，计算样本每分钟吸光度变化率△A/min。注：为减小误差，可先把工作液37℃水浴5min，混匀直接上机检测。加入物空白管样本管血清-300uL生理盐水300uL-工作液3mL3mL五、结果计算ALT或AST（U/L）=△A/min××=△A/min××1000εVtVs10006.22VtVs△A/min为两次测定的平均值Vt=反应总体积Vs=血清体积ε=6.22为NADH在340nm波长，比色皿光径1cm时的摩尔吸光系数。六、参考范围ALT（37℃）：男性≤40U/L女性≤31U/LAST（37℃）：男性≤37U/L女

4、性≤31U/L七、临床意义1.肝细胞损伤的灵敏指标2.肝癌、肝硬化3.某些化学药物引起的肝脏损害4.其他疾病或因素（肌炎、胸膜炎、肾炎、肺炎）八、注意事项1.血清不易反复冻融，避免影响酶活性；2.避免标本溶血；3.试剂变浑浊或者空白吸光度小于0.900，试剂不能使用。TBIL、DBIL测定结合胆红素未结合胆红素+加速剂（破坏氢键）二、实验原理+重氮试剂偶氮胆红素呈紫红色，测A546nm重氮盐法：（亚硝酸钠、对氨基苯磺酸）对氨基苯磺酸+HCL+NaNO2→氯化重氮苯磺酸+NaCL三、试剂与器材TBIL试剂R1主要成分：对氨基苯磺酸盐酸十二烷基三甲

5、基氯化铵DBIL试剂R1主要成分：EDTA对氨基苯磺酸盐酸TBIL、DBIL试剂R2主要成分：亚硝酸钠TBIL、DBIL校准品（2.0mL蒸馏水复溶后使用）四操作步骤TBIL测定：1.TBIL工作液配制：取R1和R2按5:1的比例混合待用；2.TBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用；3.按表操作：4.混匀，37℃保温10min，于546nm测定“A”。DBIL测定：1.DBIL工作液配制：取R1和R2按40:1的比例混合待用；2.DBIL校准液配制：取2ml蒸馏水复溶待用；3.按表操作：4.混匀，37℃保温2min，于546nm测定“A

6、”。加入物空白管校准管测定管血清--200uL校准品-200uL-生理盐水200uL--工作液4mL4mL4mL加入物空白管校准管测定管血清--160uL校准品-160uL-生理盐水160uL--工作液4mL4mL4mL五、结果计算C样品=A样品/A校准*C校准六、参考范围TBIL：3.4-17.1umol/LDBIL：0-3.4umol/L七、注意事项1.血液标本和标准液应避免阳光直照2.溶血、脂血对测定有干扰；3.试剂具有一定的强酸性，注意个人防护。八、临床意义1.血清总胆红素测定的意义：（1）黄疸及黄疸程度的鉴别（2）肝细胞损伤程度和预后的判断

7、（3）新生儿溶血症（4）再生障碍性贫血及数种继发性贫血血清总胆红素减少。2.血清结合胆红素测定的意义：结合胆红素与总胆红素的比值可用于鉴别黄疸类型。思考题1.血清转氨酶测定为什么首选双试剂法？2.胆红素标本为什么要低温、避光保存？