波棱瓜子有效部位质量控制方法及组分配伍抗肝损伤药效学初步研究

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1、成都中医药大学（药学院）二0一七届硕士研究生学位论文波棱瓜子有效部位质量控制方法及组分配伍抗肝损伤药效学初步研究PrimarystudiesonthemethodsforqualitycontrolandliverinjuryofactivefractionsofHerpetospermumcaudigerum研究生姓名：刘美琳指导教师：张梅（教授）学科专业：中药学二○一七年五月万方数据学位论文波棱瓜子有效部位质量控制方法及组分配伍抗肝损伤药效学初步研究刘美琳指导教师姓名：张梅（教授）申请学位级别：硕士专业名称：中药学论文提交时间：20

2、17.04论文答辩时间：2017.05二○一七年五月万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文摘要目的：藏药波棱瓜子用于治疗乙型肝炎疗效确切，其乙酸乙酯部位、脂肪油及多糖为其保肝护肝作用有效部位。本课题以上述有效部位为研究对象，分别对其质量控制方法进行了研究，以期为控制和评价各有效部位质量的一致性和稳定性提供参考。同时对其乙酸乙酯部位、脂肪油进行组分配伍药效学初步研究，为进一步研究确定其治疗乙型肝炎药效物质奠定基础。方法：①采用HPLC法建立波棱瓜子乙酸乙酯部位的化学指纹图谱，同时建立了其中活性成分波棱内酯A、波棱酮的含量测定方法。②

3、采用GC法建立了波棱瓜子脂肪油中主要脂肪酸（棕榈酸、亚油酸、油酸、硬脂酸）的含量测定方法。参照国家标准研究波棱瓜子脂肪油相关理化性质，测定了波棱瓜子脂肪油的皂化值、酸值、碘值、过氧化值等。③采用UV法建立波棱瓜子多糖的含量测定方法。考察用不同提取方法（回流法、超声波辅助法）对波棱瓜子多糖提取率的影响，以确定最佳提取工艺。④采用尾静脉一次性注射ConA30mg·kg-1诱发小鼠免疫性肝损伤模型，给予波棱瓜子乙酸乙酯提取物、脂肪油及二者不同剂量配伍药液，探究波棱瓜子抗肝损伤活性部位乙酸乙酯提取物与脂肪油配伍对ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠的

4、保护作用。结果与结论：①建立了不同来源的波棱瓜子乙酸乙酯部位指纹图谱分析方法，标定了19个共有峰，并采用对照品对照指认了其中3个峰，分别是波棱内酯A、balanophonin、波棱酮，同时测定了10批不同产地波棱瓜子乙酸乙酯部位中活性成分波棱内酯A的含量。10批不同产地波棱瓜子乙酸乙酯部位相似度在0.848～0.994之间。结果表明，不同产地波棱瓜子乙酸乙酯部位的指纹图谱相似度较高，其中波棱内酯A含量存在一定差异。此外，采用HPLC法建立了乙酸乙酯部位中另一活性成分波棱酮的含量测定方法，波棱酮在0.1804～0.6012μg（r=0.9

5、994）范围内线性关系良好。方法简便可行，重复性好。②GC法建立的脂肪酸含量测定方法可行，其中棕榈酸在28.87～164.98µg（r=0.9998）；亚油酸在9.53～54.48µg（r=0.9998）；油酸在206.20～1178.30µg（r=0.9998）；硬脂酸在24.55～140.29µg（r=0.9998）范围内，线性关系均良I万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文好。油酸含量在各批次波棱瓜子脂肪油中均为最高。该测定方法准确、简便，可用于脂肪油中主要脂肪酸的质量控制；波棱瓜子脂肪油的酸值、皂化值、碘值、过氧化值在一定

6、程度上也可反映波棱瓜子脂肪油的质量。③采用分光光度法（苯酚-硫酸法）建立了波棱瓜子多糖的含量测定方法。测得不同产地波棱瓜子药材中多糖含量为1.15%～2.16%。该含量测定方法准确、简便、经济，适用于波棱瓜子多糖的含量测定。通过对两种提取方法（回流法、超声波辅助法）最佳工艺的比较，回流较超声法多糖提取率提高约11%，回流法优于超声波辅助法，但差异无显著性。为波棱瓜子多糖的进一步药效学研究奠定基础。④波棱瓜子各治疗组均可降低免疫性肝损伤小鼠的肝脾脏器指数；降低小鼠肝损伤血清ALT、AST水平及NO的含量；增强肝匀浆中SOD活性，降低MDA

7、的含量；减轻ConA对肝组织的病理损伤。其中有效组分脂肪油、乙酸乙酯部位2:1配伍组各指标较模型组均有显著性差异，护肝作用最佳。波棱瓜子乙酸乙酯部位与脂肪油配伍护肝作用优于单一组分，提示配伍时具有协同增效的作用，其保肝机制可能与其抗炎、抗氧化以及清除自由基有关。关键词：波棱瓜子；乙酸乙酯部位；脂肪油；多糖；指纹图谱；含量测定；组分配伍；肝损伤II万方数据成都中医药大学2017届硕士学位论文ABSTRACTObjective:TibetanmedicineofHerpetospermumcaudigerumhashasanefficity

8、treatmentonhepatitisbanditsethylacetateextracts,fattyoilandpolysaccharidesarethefunctioneffectivepartst