波棱瓜子药材指纹图谱研究

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1、第38卷第12期西南师范大学学报(自然科学版)2013年12月Vo1．38No．12JournalofSouthwestChinaNormalUniversity(NaturalScienceEdition)Dec．2013文章编号：1000—5471(2013)12—0139一O6波棱瓜子药材指纹图谱研究①王佩龙，杨丽花，令狐浪，邹妍琳，兰小中。，廖志华，陈敏1．西南大学药学院，发光与实时分析教育部重点实验室，重庆400715；2．西藏大学农牧学院，西藏林芝860000)；3．西南大学生命科学学院，重庆400715摘要：目的：建立波棱瓜子药材的HPLC指纹图谱，为波棱瓜子药材的质量控制提

2、供保证．方法：甲醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物用甲醇溶解定容，制备样品溶液；采用RP—HPLC分析，色谱条件为WondaSilC18色谱柱(4．6mm×150mm，5m)，流动相A为50mM磷酸二氢钾缓冲盐水溶液(pH2．6)，流动相B为甲醇，程序梯度洗脱，流速0．7mL／min，柱温25℃，检测波长254nm，进样量5“L．利用中药指纹图谱相似度评价系统(2004A版)对不同批次波棱瓜子药材HPLC图谱进行分析比较．结果：建立了波棱瓜子药材的HPLC指纹图谱，以HerpetolideA为参照峰确立了波棱瓜子药材指纹图谱中的18个共有峰．结论：建立的指纹图谱的重现性及稳

3、定性均好，可用于波棱瓜子药材的质量管理规范．关键词：波棱瓜子；HPLC；指纹图谱；质量控制中图分类号：R284．1文献标志码：A波棱瓜子系葫芦科波棱瓜子属植物波棱瓜子(Herpetospermumcaudigerumwal1)的干燥成熟种子，为常用藏药，具有清胆热、泻肝火、解毒功效，临床上主治肝胆疾病，黄疸型传染性肝炎，胆囊炎，消化不良等_】]，主要分布于中国的云南、西藏等地及印度、尼泊尔等国．波棱瓜子化学成分主要包括苯呋喃类、木脂素类、香豆素类化合物等_3。‘研究表明具有抗肝损伤、抗氧化等药理活性口¨。‘波棱瓜子现行标准为部颁标准，对波棱瓜子的质量控制仅限于显微鉴别、薄层鉴别，没有涉及到

4、对有效成分的控制，远不能达到控制其质量的目的口．对波棱瓜子指纹图谱研究将为波棱瓜子质量标准建立提供重要依据，对波棱瓜子药材的标准化种植，确保其临床用药的安全都具有重要作用．本文使用具有活性的herpetolideA作为对照品，采用RP—HPLC建立了波棱瓜子药材指纹图谱，分析了12批波棱瓜子药材，建立了基于指纹图谱的质量控制方法．1仪器与材料1．1仪器日立高效液相色谱仪(检测器L一2455、输液泵L一2130)；分析天平(十万分之一)；超声清洗仪(KQ52oo①收稿日期：2O13一o1一o6基金项目：藏药巴朱抗肿瘤活性成分快速发现及作用机制研究(81102894)；西藏自治区科技厅重点项目

5、子课题“西藏道地性药材波棱瓜子有效成分研究”(2010KJGX01—36)．作者简介：王佩龙(1985一)，男，陕西宝鸡人，硕士研究生，主要从事化学及生物药物分析方面的研究．通信作者：陈敏，教授，硕士生导师．140西南师范大学学4t(自然科学版)http：／／xbbjb．SWU．cn第38卷型，昆山市超声仪器公司)．1．2试剂甲醇(SPECTRUM，色谱纯)；甲醇、石油醚、乙酸乙酯均为分析纯；HerpetolideA(自制，面积归一法确认纯度达989／5)．1．3药材表1波棱瓜子药材来源编号采集时间购买／采集地收集方式编号购买时间购买／采集地收集方式S12010．9西藏林芝采集s72012

6、．9西藏拉萨购买S22010．9西藏林芝采集S82012．9四川成都购买S32012．9安徽毫州购买S92012．9安徽毫州购买s42O12．9青海西宁购买$102012．9四川成都购买S52012．9浙江宁波购买s112012．9西藏林芝采集S62012．9四川成都购买s122O12．9西藏林芝采集2．1供试品溶液的制备波棱瓜子药材粉碎，过筛，精密称定1．000g，置于50mL三角烧瓶中，精密加入40mL甲醇，超声提取40min(200W)，回收溶剂依次用石油醚、乙酸乙酯萃取5次，收集乙酸乙酯部分，用3mL甲醇溶解，定容，10000r／min离心10min，取1mL滤液，用0．22Fm微

7、孔滤膜过滤，4℃保存．2．2对照品溶液的制备精密称取HerpetolideA0．68mg用色谱级甲醇溶解定容到10mL，配成0．068mg／mL，以0．22m微孔滤膜过滤，4℃保存．2．3HPLC分析方法色谱柱为WondaSilC18柱(4．6mm×150mm，5Fro)，柱温25℃，检测波长254nm，进样量5FI，流速0．7mL／min，流动相以(A)50mmol的磷酸二氢钾缓冲盐水pH=2．61，(B)一甲醇，采用