厚壳贻贝lysin基因的序列分析【开题报告】

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1、毕业设计开题报告生物科学厚壳贻贝lysin基因的序列分析一、综述本课题国内外研究动态，说明选题的依据和意义贝类是典型的广播生殖细胞、体外受精的无脊椎动物，其精子在卵细胞表面经历复杂的顶体反应，并最终与卵细胞膜相融合，这就决定精卵细胞中必定存在某种特殊的物质，使两性细胞能在广阔的水体中得以识别并结合。经前人研究发现，软体动物精子顶体当中的细胞溶素（lysin）在此过程中发挥了重要作用。作为典型的海产无脊椎动物，贻贝的受精作用和胚胎发育都在体外进行，但研究发现，虽然很多种贻贝共同生活在相同的海水环境中，而且生殖季节相互

2、交叠，却很少产生种间杂交现象，其原因就是异种间配子不能识别，无法受精，即存在生殖隔离现象。研究表明，成熟的贻贝精子具有发达的顶体泡，内含多种蛋白质，其中只有M7lysin与生殖密切有关，该分子所发挥的作用与鲍顶体的lysin蛋白非常类似，能够溶解卵黄膜，促进受精作用的完成，同时该分子也是贻贝间生殖隔离的关键所在。厚壳贻贝（MytiluscoruscusGould），俗称青口、海红，其干制品称淡菜，有很高的营养价值，还具有很好的药用和保健功效，是我国目前主要的贝类养殖品种之一。近年来，由于种质、病害和环境等因素的影响

3、，厚壳贻贝出现了自身体质下降、幼苗成活率低、性成熟过早、出肉率低等问题，因此培育生长状态好、抗逆能力强的优良品种成为解决贻贝养殖可持续发展的技术关键之一。杂交育种是培育良种的一条有效途径，为解决我国养殖贝类大规模死亡和一些重要经济贝类生长慢、生产周期长等问题开辟了崭新途径。因此探明厚壳贻贝生殖隔离机制，将促进其杂交育种快速实现，为培育厚壳贻贝良种提供科学依据。目前对于贻贝精子M7lysin人们也进行了探索性研究，其中贻贝（MytilusedulisLinnaeus）、地中海贻贝（Mytilusgalloprovin

4、cialisLamarck）、盖勒贻贝（MytilustrossulusGould）M7lysin序列已经测得，经比对发现，其进化与lysin、bindin类似，为正向选择方式，并在生殖隔离及物种进化中起重要作用，但关于厚壳贻贝（MytiluscoruscusGould）M7lysin的研究尚未见报道。因此本课题拟通过同源克隆法获得在厚壳贻贝生殖隔离中起到重要作用的M7lysin分子，对其cDNA序列和推导的氨基酸序列进行分析，为进一步揭示厚壳贻贝生殖隔离机理提供参考。二、研究的基本内容，拟解决的主要问题：本实验拟

5、通过兼并性引物进行PCR反应获得目的片段，再将PCR扩增条带进行割胶回收，连接入T载体并转入大肠杆菌，筛选阳性克隆测序，并与贻贝、地中海贻贝、盖勒贻贝进行比对。通过在线翻译得到相应的氨基酸序列，为揭示厚壳贻贝生殖隔离机理提供参考。三、研究步骤、方法及措施：1.目的片段的PCR扩增扩增引物SMH-G-F：GAYCCNCTTTTCTAYCTSMH-G-R：ATNTCGTGYTGTCCTCC2.产物回收与测序使用AxyPrepDNAGelExtrActioNKit进行纯化。3．连接产物转化大肠杆菌感受态利用蓝白斑筛选阳性

6、克隆，所获得的克隆利用原PCR扩增引物进行菌落PCR鉴定后，送上海英骏生物公司测序。4.数据处理与分析四、参考文献[1]VacquierVD.Evolutionofgameterecognitionprotein[J].Science,1998,281(5385):1995-1998.[2]MozingoNM,VacquierVD,ChandlerDE.Structuralfeaturesoftheabaloneeggextracellarmatrixanditsroleingameteinteractiondur

7、ingfertilization[J].MolRepAndDevel,1995,41:493-502.[3]SwansonWJ,VacquierVD.Theabaloneeggreceptorforspermlysineisagiantmultivalentmolecule[J].ProcNatlAcadSciUSA,1997,94:6724-6729.[4]SwansonWJ,VacquierVD.ExtraordinarydivergenceandpositiveDarwinainselectioninains

8、agenicproteincoatingtheacrosomalprocessofabalonespermatozoa[J].NatlAcadSciUSA,1995,92:4957-4961.[5]LeeYH,OtaT,VacquierVD.Positiveselectionisageneralphenomenonintheevolutionofabalon