第八章 病原学诊断与防治

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1、第八章病原学诊断与防治细菌学诊断细菌学诊断内容包括:查病原菌及其成分（抗原、代谢产物）——细菌学诊断查特异性抗体:用已知的抗原检测标本中未知的抗体——血清学诊断查致病菌特异性DNA片段为目的——基因诊断细菌学诊断（一）标本的采集和送检原则严格执行无菌操作不同期不同标本用抗生素以前采集病变明显部位运送注意保存标本必须新鲜细菌感染的检查方法与防治原则一、病原菌检测（二）病原菌检测的方法1、形态结构检查2、分离培养鉴定3、抗原检测4、其他检测（二）致病菌的检验程序药物敏感试验标本直接涂片检查分离培养生化试验血清

2、学试验动物试验明确诊断初步诊断（结合临床）分子生物学技术其他检测技术1.形态结构检查一般程序：标本涂片固定染色镜检（观察镜下特征：菌体形态、排列、染色性及特殊结构等）初步鉴定炭疽杆菌病原菌检测的主要技术（1）显微镜放大技术A.普通光学显微镜以可见光为光源分辨率：0.25μm放大倍数：×1000病原菌检测的主要技术B.电子显微镜以电子流代替光波，电磁圈代替放大透镜分辨率：1nm放大倍数：10万以上电镜标本制作复杂且必须真空干燥状态下观察--不能观察活的微生物猴子脾脏上炭疽杆菌病原菌检测的主要技术C.其他显微

3、镜:适用不同观察目的•暗视野显微镜•相差显微镜•荧光显微镜•共聚焦显微镜病原菌检测的主要技术（2）染色技术细菌易与带正电荷的碱性染料结合而着色简单染色法：只用一种染料，过程简单，可观察菌体形态、排列方式复合染色法：用二种或二种以上染料多步骤染色,能反映菌体内部染色特征病原菌检测的主要技术革兰染色法：革兰阳性菌（紫色）革兰阴性菌（红色）抗酸染色法：抗酸阳性菌（红色）抗酸阴性菌（蓝色）特殊染色法：细菌荚膜、芽孢、鞭毛、细胞壁、核质等染色炭疽杆菌（芽孢）粪产碱杆菌鞭毛染色（周鞭毛）革兰染色法(Gramstain

4、)：标本涂片，固定结晶紫初染→碘液媒染→95%乙醇脱色→沙黄复染→革兰阳性菌（G+）——蓝紫色；革兰阴性菌(G-)——淡红色。革兰阳性菌革兰阴性菌返回抗酸染色法(acid-faststain)：以5％石炭酸复红染色，再用3％盐酸酒精脱色，然后用美蓝复染，则分枝杆菌呈红色(+)，其他细菌和背景物质为蓝色(-)。抗酸染色法—分枝杆菌属的实验诊断实验过程：取痰液→涂片（略厚）→干燥→固定→石炭酸复红染色8~10分钟后→用3%的盐酸酒精脱色约1~2分钟，脱色时轻摇玻片，直到涂片颜色脱去为止→水洗后，用碱性

5、美蓝复染1分钟→水洗，印干→镜检返回2.分离培养与鉴定（一般程序）标本（或增菌后）接种普通琼脂平板血琼脂平板选择培养基平板培养特征：营养、生长条件菌落特征溶血环特征等纯菌染色镜检：根据形态特征初步鉴定生化反应：如肠道杆菌的乳糖发酵试验纯菌炭疽杆菌（普通平板）2.分离培养与鉴定药敏试验血清学鉴定：用已知的抗体检查未知的抗原鉴定细菌的种、型毒力鉴定内、外毒素检测动物试验：家兔、豚鼠等纸片法：只可定性试管法：可定量（测MBC、MIC）3、其他检测代谢产物的检测：如气相色谱法鉴定厌氧细菌PCR检测核酸：注意防止污

6、染、易出现假阳性基因芯片二、血清学诊断原理：用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异性抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。（用已知Ag测未知Ab）标本：血清和其他体液标本要求:双份血清(早期；恢复期)诊断恢复期或一周后血清Ab效价比早期升高4倍及4倍以上现症感染血清学诊断常用方法?凝集试验：肥达试验（Widaltest）---诊断伤寒、副伤寒外斐试验（Well-Felix）---诊断立克次体病?中和试验：抗“O”试验---诊断链球菌性风湿病肥达试验是一种试管凝集反应。用已知的伤

7、寒杆菌O、H抗原和甲、乙型副伤寒杆菌H抗原,与病人血清作定量凝集试验,以测定患者血清中无相应抗体存在,作为伤寒、副伤寒诊断的参考。特异性预防与治疗人工主动免疫是将疫苗及类毒素接种于人体，使机体主动产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。自然免疫患病、隐性感染人工免疫疫苗、类毒素人工被动免疫是注射含有特异性抗体的免疫血清、纯化免疫球蛋白抗体、细胞因子或致敏的免疫细胞等，使机体立即获得特异性免疫，因而作用及时。人工被动免主要用于急性传染病的治疗或紧急预防。自然免疫胎盘、初乳人工免疫抗毒素、丙

8、球人工被动免疫1．抗毒素（antitoxin）抗毒素能中和相应外毒素，阻断各种毒素的作用。注射前务必先做皮肤试验，测试有无超敏反应。必要时可采用脱敏疗注射法。应用人源性免疫球蛋白可避免发生超敏反应。2．抗菌免疫血清（antibacterialimmuneserum）含有抗原特异性抗体的血清，是用细菌免疫动物制成的。目前已基本淘汰。只是某些多重耐药菌（如铜绿假单胞菌）感染时，仍可考虑抗菌血清治疗。人工被动免疫3．胎盘（丙种）球蛋