第八章 病原学诊断与防治

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1、病原学诊断与防治第一节细菌学诊断包括:细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体一、病原菌检测（确诊依据）分离和鉴定标本细菌的形态和结构检查病原菌Ag的检测其他标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。标本做好标记，详填化验单，保证各环节准确无误（一）标本采集与送检原则（二）细菌形态与结构检

2、查取标本涂片、染色镜检。根据镜下典型的形态、排列、染色性作出初步诊断。显微镜放大法：光镜、电镜(TEM,SEM)染色法：菌细胞可与带正电荷的碱性染色剂结合。最常用的是革兰染色法。另有单染色法、抗酸染色法、特殊染色法（荚膜、鞭毛、芽胞等）。光学显微镜革兰染色法结果葡萄球菌G(+)E.coliG(-)特殊染色法（荚膜）结果特殊染色法（芽胞、鞭毛）结果试管稀释法单片纸碟法（三）分离和鉴定培养特征形态特性生化反应血清学鉴定动物试验药物敏感试验（已知Ab检测未知Ag）ANTIBIOTICSUSCEPTIBILITYTESTING--Tube

3、DilutionTechniquehttp://www.arches.uga.edu/~lace52/procedure.htmlANTIBIOTICSUSCEPTIBILITYTESTING----Theagardiffusiontesthttp://www.arches.uga.edu/~lace52/procedure.htmlhttp://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab21/abiot.htmlANTIBIOTICSUSCEPTIBILITYTESTING-

4、---TheagardiffusiontestANTIBIOTICSUSCEPTIBILITYTESTING----Theagardiffusiontesthttp://student.ccbcmd.edu/courses/bio141/labmanua/lab21/measure.html致病菌的检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与鉴定病原菌抗原检测其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌

5、素测定分子生物学技术动物试验（四）病原菌抗原的检测酶免技术协同凝集技术免疫荧光技术对流免疫电泳免疫印迹技术（五）病原菌核酸的检测核酸杂交PCR基因芯片技术人体受致病菌感染后，免疫系统被刺激后发生免疫应答产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。故可用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人血清进行试验，故称血清学诊断(serologicaldiagnosis)最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大于等于4

6、倍时方有意义。抗体效价低时不要轻易否定常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。二、血清学诊断（辅助诊断）临床实验室分离和鉴定微生物的过程临床实验室分离和鉴定微生物的过程第二节特异性预防与治疗特异性防治：应用获得性免疫的原理，给机体注射或服用病原微生物抗原（包括类毒素）或特异性抗体以达到预防和治疗感染性疾病的目的。人工免疫人工主动免疫人工被动免疫第一代疫苗死疫苗活疫苗第二代疫苗亚单位基因工程第三代疫苗DNA疫苗抗毒素抗菌血清胎盘球蛋白、丙种球蛋白细胞免疫制剂二、人工被动免疫人工被动免疫(a

7、rtificialpasstiveimmunity)：注射含有特异性抗体的免疫血清或纯化免疫球蛋白，或细胞因子等免疫制剂，使机体即刻获得特异性免疫，因而作用及时。但这些免疫物质不是病人自己产生的，故维持时间短。主要用于治疗或紧急预防。两种人工免疫的比较区别要点人工主动免疫人工被动免疫免疫物质抗原抗体或细胞因子等接种次数1-3次1次免疫出现时间慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出现）免疫维持时间长（数月~数年）短（2-3W）用途多用于预防多用于治疗或应急预防第三节病毒学诊断标本的采取与送检病毒的分离与鉴定病毒感染的血清学诊断病毒感染

8、的快速诊断二、病毒的分离与鉴定（一）病毒的分离（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定（一）病毒的分离方法动物接种选择易感动物及接种部位，观察发病情况鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜、尿囊腔、羊膜腔、卵黄囊），分离流感病毒最常