《病原学诊断与防治》PPT课件

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1、第八章病原学诊断与防治第一节细菌学诊断包括；细菌学诊断——检测病原菌及其抗原，产物或核酸血清学诊断——检测患者血清中特异性抗体一、病原菌检测标本采集时应注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。根据致病菌在不同病期的体内分布和排出部位，采取不同标本。应在使用抗菌药物前采集标本，否则在培养时应加入拮抗剂。尽可能采集病变明显部位的材料。标本必须新鲜，采集后尽快送检。送检过程中要采取适当的保存方式。标本做好标记，详细填写化验单，保证各环节的准确无误。标本采集与送检原则致病菌的检验程序标本直接涂片染色镜检分离培养与鉴定病原菌抗原检测其它检测形态、结构、染色性涂片镜检菌落特征生

2、化反应药敏试验血清学反应沉淀反应协同凝集免疫荧光对流免疫电泳酶免疫测定免疫印迹细菌代谢产物（气相色谱）细菌核酸（PCR）噬菌体分离细菌素测定分子生物学技术动物试验人体受致病菌感染后，其免疫系统被刺激后发生免疫应答而产生特异性抗体。抗体的量常随感染过程而增多，表现为效价（滴度）的升高。因此，用已知的细菌或其特异性抗原检测患者体液中有无相应特异抗体和其效价的动态变化，可作为某些传染病的辅助诊断。一般采取病人的血清进行试验，故称为血清学诊断(serologicaldiagnosis)。血清学诊断试验最好取患者急性期和恢复期双份血清标本，当后者的抗体效价比前者升高大

3、于等于4倍时方有意义。常用方法：直接凝集试验、乳胶凝集试验、沉淀试验、补体结合试验、中和试验、ELISA。第二节血清学诊断第二节病毒学诊断一标本的采集与送检（principleofcollectionspecimen）1早期（前驱期、急性期、发病前1~2天）2根据不同病毒感染，采集不同部位标本3病毒易被灭活（细胞内寄生，怕热不怕冷），低温保存，快速送检4标本无菌采集与处理（加抗生素，除菌并防止污染）5血清学实验检查抗体（双分血清）二病毒的分离培养与鉴定（virusisolationanddetermination）（一）病毒的分离方法动物接种选择易感动物及接

4、种部位，观察发病情况鸡胚培养不同病毒选择不同接种部位（绒毛尿囊膜，尿囊腔，羊膜腔，卵黄囊），分离流感病毒最常用。细胞培养：分离病毒最常用的方法（1）原代细胞—来源于动物、鸡胚、人胚组织细胞，对多种病毒敏感，但只能传2-3代。（2）二倍体细胞—在体外分裂50-100代后仍保持2倍体染色体数目的单层细胞。（3）传代细胞—能在体外无限传代的细胞多由癌细胞或二倍体细胞突变而来。病毒在培养细胞中增殖的指标细胞的变化（1）出现细胞病变效应（CPE）：即某些病毒在细胞内增殖引起的特有的细胞病变（细胞变圆、聚集、坏死、脱落等）（2）形成细胞融合（多巨核细胞）（3）形成包涵体

5、：某些病毒在细胞浆或核内增殖后形成的嗜酸或嗜碱性的团块状结构。（病毒增殖场所）红细胞吸附干扰现象细胞代谢改变（pH）正常细胞病变细胞（二）病毒的数量与感染性测定（三）新分离病毒的鉴定核酸类型、理化性状、形态、血清学鉴定、基因测序和生物对比。三、病毒感染的血清学诊断用已知病毒抗原检测病人血清中相应抗体以诊断病毒性疾病（中和实验、补体结合实验、血凝抑制实验、凝胶免疫扩散等）四、病毒感染的快速诊断(一)形态学电镜和免疫电镜——直接观察病毒光镜——大病毒和包涵体（二）检测病毒蛋白抗原用已知特异性抗体直接检测病毒蛋白抗原（简便、敏感、特异）常用方法：免疫荧光技术（IF

6、）固相放射免疫测定（SPRIT）酶免疫技术（EIA）等。（三）检测病毒特异性IgM抗体检测病毒特异性IgM抗体可诊断急性感染或证明病毒复制。（四）检测病毒核酸1核酸杂交斑点杂交（dothybridization）原位杂交（insitehybridization）DNA印迹杂交（Southernblot）RNA印迹杂交（northernblot）2核酸扩增聚合酶链反应（polymerasechainreaction，PCRDNA）连接酶链反应（ligasechainreaction，LCR）反转录PCR（ReversetranscrptasePCR，RT—PC

7、R(RNA)3基因芯片技术（genechip）第三节真菌学诊断标本直接镜检深部标本染色标本G染色G+圆形大小不均有芽生孢子分离培养沙氏培养基菌落观察角质标本不染色标本10%KOH观察菌丝、孢子类型大小颜色皱摺鉴定动物实验（致病性真菌）接种观察发病情况死亡后取标本进一步鉴定皮肤超敏反应快速诊断血清学实验核酸检测真菌毒素检测死疫苗活疫苗类毒素新型活疫苗基因工程疫苗重组载体疫苗第四节特异性预防与治疗一、人工主动免疫(artificialactiveimmunity)：将疫苗(vaccine)或类毒素接种于人体，使机体产生获得性免疫力的一种防治微生物感染的措施，主要

8、用于预防。合成疫苗亚单位疫苗DNA疫苗转基因植物疫苗