苏州大学生化试题

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1、1.写出大多数限制性内切酶识别DNA序列的结构特点？生物体内能识别并切割特界的双链DNA序列的一种内切核酸酚。它是可以将外來的DNA切断的酚，即能够限制杲源DNA的侵入并使Z失左活力，但对口己的DNA却无损害作用，这样可以保护细胞原有的遗传信息。由于这种切割作用是在DNA分了内部进行的，故名限制性内切酶（简称限制酶.II型（typeII）限制与修饰系统所占的比例最大，达93%。II型齣相对来说最简单，它们识别回文对称序列，在回文序列内部或附近切割DNA,产生带3•-径基和磷酸基团的DNA产物，需Mg2+的存在才能发挥活性，相应的修饰

2、酶只需SAMo识别序列主要为4-6bp,或更长且呈二重对称的特殊序列，但有少数酶识别更长的序列或简并序列，切割位置因酶而异，冇些是隔开的。Ils型（typeIls）限制为修饰系统，占5%,少II型具有相似的辅因子要求，但识别位点是非对称，也是非间断的，长度为4-7bp，切割位点可能在识别位点一侧的20bp范围内。II型限制酶般是同源二聚体（homodimer）,由两个彼此按相反方向结合在一起的相同亚单位组成，每个亚单位作用在DNA链的两个互补位点上。修饰酶是单体，修饰作用一般由两个甲基转移酶来完成，分别作用于其屮一条链，但甲基化的碱

3、基在两条链上是不同的。在II型限制酶屮还有一类特殊的类型，该酶只切割双链DNA屮的一条链，造成一个切口,这类限制酶也称切口酶（nickingenzyme）,如N.BstNBI。2.PCR循环的参数是如何确定的？（1）变性时间是如何确定的？在选择的变性温度下，DNA分了越长，两条链完全分开所需的时间也越长。如果变性温度过低或时间太短，模板DNA屮往往只有富含AT的区域被变性。在PCR的第一个循环中，有时常把变性吋间设计为5min,来增加大分子模板DNA彻底变性的概率，又称此为预变性。当模板DNA的G+C含量超过55%时，需要更高的变性

4、温度，來源于古细菌的DNA聚合酶比TaqDNA聚合酶更能耐受高温，因此更适合用來扩増富含GC的DNA模板。（2）复性温度的确定冇什么考虑？复性过程（即退火）采用的温度至关重要。如果复性温度太高，寡核琶酸引物不能与模板很好地复性，扩增效率将会非常低。如果复性温度太低，引物将产生非特界性复性，从而导致非特异性的DNA片段的扩增。（3）延伸的时间是如何确定的?TaqDNA聚合酶在最适反应温度（72〜78°C）下聚合速率约为2000bp/mirio根据多数研究者的经验，确定了一个规则，即：靶基因的每1000bp的扩增产物的延伸时间被设计为l

5、min,以此类推。对于PCR的最后一个循环，许多研究者常把延伸时间增加为以前循环的延伸时间的3倍以上，以使所有扩增产物完成延伸，这又称为后延伸。（4）循环数目一般都为30,这个数值是怎么来的？PCR扩增所需的循环数II决定于反应体系中起始的模板拷贝数以及引物延仲和扩增的速率。一旦PCR反应进入几何级数增长期，反应会一直持续下去，直至某一成分成为限制因素。从这一点上來说，扩增产物中绝大多数应该是特片性的扩增产物，而非特异性的扩增产物低到难以检测的程度。川TaqDNA聚合酶在一个含有105个拷贝的靶序列的反应体系中进行30个循环后往往可

6、以做到上述的理想情况。3.SDS-PAEG主要涉及那些试剂？下层胶：上层胶:水水130%丙烯酰胺30%丙烯酰胺1.5MTris(pH8.8)1.5MTris(pH6.8)10°oSDS(u1)10°oSDS(u1)10%AP(p1)10%AP(ul)TEMED(uI)TEMED(M1)1.在最适条件卜细菌繁殖一代仅需25分钟，解释为什么细胞能这么快分裂(a)在复制原点形成两个复制叉，复制义以相反的方向移动总到它们在原点对而的某一点相遇为止，因而每个复制体复制基因组的一半(2.6*106碱基对)，在每一个复制叉上，以1000个核廿酸/

7、秒的速率合成两条新链(前导链和滞麻链)(2000个核廿酸/秒等于1000个碱基对7秒).所以复制全部的染色体需要2.6*1001000=2600秒二43分20秒.(b)尽管仅仅只冇一个原点(O),但在前一个复制叉到达终点位置Z前复制可以反复起始•因而在每一个双链DNA分子上存在着2个以上的复制叉.虽然复制一个染色体仍IH需要大约43分钟，但是由于起始的速率加快，完全复制一个染色体显得间隔更短了.2.Pr合成体系的内容和各成分的作用pCR反应体系屮包含特异性寡核昔酸引物.DNA模板、DNA聚合酶dNtP及含有必需离子的反应级冲液。一、

8、寡核普酸引物PCR反应屮的寡核廿酸引物至少应含有玲个与DNA模板序列完全互补的核节酸.皿好长达20—24个核普酸，这样才能保证扩增反应的特异性。低温冷却液循环泵寡核昔酸引物在NCR反应中的浓度通常是。.t一l.OlumWL,这一浓度足