关于酪蛋白的答疑的思考-回复

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1、1•问：请问为什么C线包被3mg/ml不出现条带，而2mg/ml的就冇条带出现呢？T：正常，从蛋门固定基本原理岀发，好好想想。NC结合蛋门的能力是有限的，其结合位点是会饱和的，假设其结合能力仅仅为2mg,你包被3mg,那边必然有和当一部分是结合不牢固或者压根就没固定住的，样本层析之后，金标蛋口结合了这些不牢固的蛋口，就会流渥，不会显色。检测线，也会有同样的情况，不过检测线包被过址的影响不止这么简单。我主耍指夹心法。思考：双抗体夹心时，T线过量的影响：1•严重过虽时，T线表面蛋口结合不牢，会被冲走，而C线的二抗如果种属合适，会被T线蛋白封闭，造成显色不均或颜色浅等问题，如果已经结合了金

2、标复合物，那就会带运一部分信号，导致灵敏度下降。T：是的2.夹心法假阳性很多时候是由丁T抗体和金标抗体的非特开结合，所以T线过呈，也可能造成非特界反应。T：这里耍两说，T线抗体的含量越高，造成非特界性结合的儿率就越人，但是当过虽包被时，部分假阳性信号也会被冲進，适址的过饱和包被，可能对屏蔽假阳性是有利的。2•问：请教一下各位人虾，多抗标记的时候耍注意哪些细节呢？T：尽虽别标记多抗，实在是想标记多抗，把标记PH提高点。思考：多抗是各种抗体的混合物，等电点不一，为避免某些抗体带止点引起金聚沉，所以应该高PH。但是如果主耍起作川的目的抗体等电点较低，过髙的PH会导致英带人星负电，从而减少与

3、胶体金结和的机会，导致标记效率下降，金标复合物性能受影响。T：是的，所以标记PH也不能太高，是需耍做梯度实验探索的。3.关于酪蛋白的思考1•酪蛋口和BSA等起作用的原因是他们与非特界性位点结合，从而起到封闭作川，而不是像盐等阴阳离子围绕界性电荷周围，简单的干扰静电作丿U。T：其实酪蛋口可以干扰静电作用，而且它同时是一种蛋口，因此有时候采用酪蛋口来处理电荷作川造成的并常现象，耍比川盐离子效果好，因为人呈的盐离子对金标记复合物/蛋口有消极作丿IJ。2.酪蛋口的溶解问题：酪蛋口等电点4.8,也就是在中性水中溶解时，COOH有电离出H+离子的倾向，而弱电解质在溶液中电离和结合是和对平衡的状态

4、，如來打破平衡，使之倾向丁•电离，那么溶解度就会增人，所以在弱碱性环境中，0H•的存在，消耗酪蛋门电离出的H+,这样平衡被打破，酪蛋门溶解度增大。然后加入稀酸中和掉过多的0H・，使工作液回复的中性。而在强酸环境下，低丁•酪蛋口等电点时，NH2有吸收H+,带止点的倾向，而强酸可以提供H+,所以酪蛋口在强酸下也易溶解，但是强酸性可能使蛋门质变性，而目•最终应用时是在中性条件，所以酸性溶解再调PH是不合适的。T：是的，其实在胶体金工艺体系中，人部分的溶液配制都是弱碱性环境。3.酪蛋口消假阳：当T线蛋口整体或某些基团带止点时，会结合带负电的胶体金或金标抗体，而酪蛋口的强负电，和金标复合物竞争

5、与T线结合，从而形成封闭。但是说酪蛋口作川的抛物线我不太明口。如采说对整体性能表现是抛物线我理解，一定范围内，少量酪蛋口封闭作川，消假阳，试纸条性能提升，但人量酪蛋口存在，其对金标复合物的排斥作川，影响金标复合物和CT线的结合，使试纸条整体表现下降。如果单纯说他的封闭作用呈抛物线，难道是高浓度时造成假阳？这点不是很理解。而H-您后面举了SDS和肝素钠的例子，我更倾向丁把抛物线理解成试纸条整体农现。T：抛物线如图所示：AB图A是一条映•型的正向抛物线，图B是反向抛物线，随着酪蛋白加入呈增加，信号的强度变化如图B所示，当人量的酪蛋口完全屏蔽抗原抗体的静电作用力的时候，再继续加入酪蛋口，信

6、号不再下降。我觉得你可能理解错了抛物线的意思。2.酪蛋口在金复溶液中的作用，干燥后特别红，而不加的干燥后发暗，我理解的是，复溶液中加入酪蛋口，酪蛋口因为负电而在溶液中呈分散状态，而对金标复和物的排斥作川，也使金标复合物分散程度加人，从而避免金标复合物口身交联，交联之后颗粒加人，颜色会加深变暗。T：是的2.T：就比如，我们在对临床样本检测的时候，如果工艺不是很成熟，遇到新鲜抗凝样本，特别是川:素钠抗凝样本的时候,对信号会有明显干扰一样。因为肝素钠就是靠其强负电荷来抗凝的，如果不对样品垫进行处理,直接检测新鲜的肝素钠抗凝的样本，会导致显色很弱，甚至不显色，甚至连C线都不显色。思考：如何消

7、除肝素钠的影响，肝素钠酸性条件下水解，但是试纸条用酸性体系比较危险。另外肝素钠的效价随NaCI强度增加而下降，所以，样品垫应该川含1%甚至更髙的NaCI缓冲液处理，來对抗肝素钠的影响。而NaCI的增加，对体系是有影响的，可能会降低灵敏度，所以加强抗干扰性的同时，还需耍川其他手段，简单的比如T线浓度、金标复合物浓度等來提髙一下灵敏度。所以您当初说过“欲扬先抑”，我回过头來想想，就是当需耍提高灵敏度，充分发挥抗原抗体性能的情况下，通常会伴随着非特异反应，因为抗