实验-酪蛋白的制备.docx

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1、实验四酪蛋白的制备一、实验目的1、学习从牛奶中制备酪蛋白的原理和方法。2、掌握等电点沉淀法提取蛋白质的方法。二、实验原理牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。三、材料、试剂与仪器1.材料新鲜牛奶2.试剂（1）95%乙醇1200mL（2）无水乙醚1200mL（3）0.2mol/LpH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液300ml先配A液与B液A液：0.2mol/L醋酸钠溶液称NaAC·3H2O54.44g，定容至2000m

2、l。B液：0.2mol/L醋酸溶液，称优纯醋酸（含量大于99.8%）12.0g定容至1000ml。取A液1770ml，B液1230ml混合即得Ph4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液3000ml。（4）乙醇—乙醚混合液乙醇：乙醚=1：1（V/V）3.仪器离心机、抽滤装置、精密pH试纸或酸度计、电炉、烧杯、温度计四、操作步骤1.酪蛋白的粗提100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7的醋酸缓冲液100mL.用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟（3000r/min）。弃去清液，得酪蛋白粗制品。2.酪蛋白的纯化（1）用水洗涤沉淀3次，离心10

3、分钟（3000r/min），弃去上清液。（2）在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。（3）将沉淀摊开在表面上，风干；得酪蛋白纯品。3.准确称重，计算含量和得率。含量：酪蛋白g/100mL牛乳（g%）式中理论含量为3.5g/100mL牛乳。五、实验结果及分析六、思考题1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？