体外培育牛黄对COPD大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级ShanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文体外培育牛黄对COPD大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡研究StudyonTypeⅡAlveolusEpithelialCellsApoptosisofCOPDRatsProcessedbyICCB研究生姓名：李晋鹏导师姓名、职称：白丽教授学科、专业名称：中医内科学研究方向：中医药防治肺系疾病的研究申请学位类型：科学学位二O一七年五月三十一日山西中医学院学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人

2、在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：2017年5月31日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西中医学院有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅。本人授权山西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索

3、，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：论文导师签名：2017年5月31日中文摘要目的：探讨体外培育牛黄对Ⅱ型肺泡上皮细胞的保护作用，从而揭示体外培育牛黄对COPD的作用机理，并为体外培育牛黄联合激素治疗慢性阻塞性肺疾病提供理论依据。方法：将50只雄性SD大鼠按随机数字表进行随机分组:空白对照组（A），COPD模型组（B）、牛黄干预组（C)、布地奈德干预组(D)、牛黄+布地奈德干预组(E)。COPD模型组（B组）：第1天和第15天在SD大鼠气道内

4、注入0.1ml脂多糖溶液，第2～28天(第15天除外)关在自制熏烟箱内被动吸烟2次，30min*12支烟/次，中间间隔2小时呼吸正常空气。空白对照组(A组):第1天及第15天在大鼠气道内注入0.1ml生理盐水。牛黄干预组（C组）：在每次烟熏前1小时给予体外培育牛黄灌胃（800mg/kg）；激素干预组（D组）：在每次烟熏前1小时给予雾化吸入布地奈德（1mg/d）。牛黄+激素干预组（E组）：在每次烟熏前1小时给予体外培育牛黄灌胃（800mg/kg）和雾化吸入布地奈德（1mg/d）。4周后用10%水合氯醛(3ml

5、/kg)腹腔注射麻醉大鼠，行肺功能检查，观察血清中SAA含量变化、肺组织病理改变，利用免疫组化测定Caspase-3的表达及TUNEL技术检测Ⅱ型肺泡细胞的凋亡。结果：1.肺组织病理切片提示造模均成功；2.肺功能测定：与A组相比，B组大鼠FEV0.3/FVC(%)均降低，气道阻力（RI）增高，差异有统计学意义（P<0.05），证明模型组符合COPD肺功能改变；5组大鼠肺功能FEV0.3/FVC、RI多重比较差别均有统计学意义（P<0.05）；5组大鼠的FEV0.3/FVC由高到低依次是A>E>D>C>B，气

6、道阻力（RI）由高到低依次示B>C>D>E>A；3.SAA测定：与正常对照组比较，COPD模型组的SAA显著升高，差异有统计学差异（P<0.05）；5组大鼠血清中的SAA含量多重比较，除C组和D组尚不能认为有统计学意义外（P>0.05），其余各组比较组间差别有统计学意义（P<0.05）；大鼠血清中的SAA含量由高到低是：B>（C或D）>E>A；4.染色后的切片Caspase-3阳性蛋白在普通显微镜下观察呈棕黄色或黄褐色。与A组比较，COPD模型组的肺组织灰度值明显降低，差异有统计学差异（P<0.05）；5组

7、大鼠灰度值灰度值多重比较均有统计学意义（P<0.05）；灰度值由高到低依次是A>E>D>C>B，即Caspase-3在各组中的表达由高到低为B>C>D>E>A；5.Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡指数：TUNEL染色显示细胞核内含有棕黄色颗粒者为TUNEL阳性细胞。与正常对照组比较，COPD模型组的Ⅱ型肺泡上皮细胞的凋亡指数显著升高，差异有统计学差异（P<0.05）；5组大鼠的凋亡指数多重比较均有统计学意义（P<0.05）；5I山西中医学院2017届硕士学位论文组大鼠凋亡指数由高到低依次是B>C>D>E>A。结论：(1

8、)熏烟叠加气管内滴注脂多糖法复制COPD模型，成功率高，能基本模拟COPD的病理改变。（2）体外培育牛黄具有抗炎作用，可以使大鼠外周血SAA水平明显降低。（3）COPD大鼠模型发生了Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡，体外培育牛黄和吸入糖皮质激素可以降低模型组大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡，并且两者联合应用更能降低Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡，延缓COPD的进行性发展。关键词：慢性阻塞性肺疾病；体外培育牛黄；Ⅱ型肺泡上皮细胞；细胞凋亡；II