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《机械性创伤诱发大鼠肺泡ⅱ型上皮细胞凋亡机制研究(可编辑)》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、机械性创伤诱发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制研究山西医科大学博士学位论文机械性创伤诱发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制的研究姓名:戴文娟申请学位级别:博士专业:呼吸内科指导教师:刘卓拉2011-05-10山西医科大学博士学位论文机械性创伤诱发大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡机制的研究摘要研究目的:1建立机械性创伤大鼠模型;TNF-a、肾上腺素损伤大鼠模型;拉贝洛尔干预大鼠模型。2观察机械性创伤时肺组织中FoxA1mRNA和蛋白质的表达改变及肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡。3观察TNF-a、肾上腺素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞Fox
2、A1mRNA、蛋白质表达的影响及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡。4研究TNF-a、肾上腺素对大鼠肺组织中FoxA1mRNA、蛋白质表达的影响及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡。研究方法:1机械性创伤对大鼠肺组织FoxA1mRNA和蛋白及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响建立非致死性机械性创伤模型:麻醉大鼠后,将其置于Noble-Collip创伤仪(直径12英寸),以40rpm的转速,旋转200圈,造成大鼠非致死性创伤。以ELISA法检测大鼠血清中TNF-a、肾上腺素含量;使用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹检测创伤组和伪创伤
3、组大鼠肺组织FoxA1mRNA的表达的变化;对大鼠肺组织切片进行TUNEL和肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性标志物SP-C染色检测大鼠肺组织中凋亡的肺泡Ⅱ型上皮细胞。2TNF-a、肾上腺素体内实验对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响建立TNF-a、肾上腺素损伤离体细胞模型:100ng/mlTNF-a和2000ng/ml盐酸肾上腺素刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞。运用荧光定量PCR、免疫蛋白印迹检测TNF-a、肾上腺素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1mRNA、蛋白质表达,同时运用流式细胞术检测大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡。3TNF-a、肾上腺
4、素体内实验对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响建立TNF-a、肾上腺素损伤大鼠模型:向大鼠腹腔分别注射TNF-α(2.5ug/kg)、盐酸肾上腺素(1ml/kg);拉贝洛尔干预模型:在给大鼠灌胃盐酸拉贝洛尔后3h、6h、24h后再放入Noble-Collip创伤仪以40r/min转动200圈造成机械性创伤。运用免疫蛋白印迹检测这三种模型中大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1蛋白质表达,通过TUNEL和SP-C免疫组化染色对比,检测大鼠肺组织中肺泡Ⅱ型上皮细胞的凋亡,同时运用ELISA法检测三种大鼠模型中血清中TNF-a、肾上腺素
5、含量。研究结果:1机械性创伤对大鼠肺组织FoxA1mRNA和蛋白及大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响1.1机械性创伤对大鼠分泌肾上腺素和TNF-α的影响以ELISA法检测大鼠血清中TNF-a、肾上腺素含量,创伤后各时间点血清中肾上腺素I山西医科大学博士学位论文和TNF-α含量逐渐上升,分别于创伤后6h和3h达高峰,峰值为(1.7560±0.1311)ng/ml和135.0898±1.5349ng/l,差异有统计学意义(P0.01)1.2机械性创伤致继发性肺损伤对FoxA1mRNA和蛋白质表达的影响使用实时荧光定量P
6、CR和免疫蛋白印迹检测创伤组和伪创伤组大鼠肺组织FoxA1mRNA的表达的变化。结果显示创伤组FoxA1mRNA表达较伪创伤组增高,FoxA1蛋白表达在创伤组均高于伪创伤组,于创伤后24h达到高峰(P0.01)。1.3机械性创伤对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响TUNEL和肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性标志物SP-C染色结果表明大鼠创伤后出现肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡。2TNF-a、肾上腺素对离体大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响2.1TNF-a、肾上腺素对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1mRNA的表达影响使用实时荧光定量PCR和免疫蛋
7、白印迹检测各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞FoxA1mRNA和蛋白质的表达的变化。结果显示盐酸肾上腺素、TNF-a刺激后FoxA1mRNA和蛋白表达明显上升,24小时达到高峰。差异有统计学意义(P0.01)。2.2TNF-a、肾上腺素对肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡的影响采用流式细胞术检测了100ng/mlTNF-a和2000ng/ml盐酸肾上腺素刺激大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞后的凋亡率,结果表明,两组刺激12小时后大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡率显著上升,与对照组比较差异有统计学意义。3TNF-a、肾上腺素体内实验对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
8、3.1TNF-a、肾上腺素对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响使用实时荧光定量PCR和westernblot检测各组FoxA1蛋白的表达情况,结果显示,FoxA1蛋白表达在TNF-a注射组、盐酸肾上腺素注射组均高于生理盐水对照组,于创伤后6h达到高峰,差异有统计学意义(P0.01)以ELISA法检测大鼠血清中TNF-a、肾上腺素含量,结果显示,TNF-a注射组、盐酸肾上腺素注射组与生理盐水对照组相
