黄曲霉毒素g1对体外原代培养的大鼠肺泡ⅱ型上皮细胞的影响

《黄曲霉毒素g1对体外原代培养的大鼠肺泡ⅱ型上皮细胞的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、中国药理学与毒理学杂志２００７年４月；２１（２）：９９－１０６ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００７Ａｐｒ；２１（２）：９９－１０６·９９·黄曲霉毒素Ｇ对体外原代培养的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响１申海涛，吕平，张祥宏，邢欣，邢凌霄，严霞，王俊灵（河北医科大学基础医学研究所病理研究室，河北石家庄０５００１７）摘要：目的进一步研究黄曲霉毒素Ｇ１（ＡＦＧ１）对关键词：黄曲霉毒素类；肺泡；上皮细胞；表面活可能作用的靶细胞ＳＤ大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞性蛋白Ｃ（ＡＴⅡ）损伤的生物学作用。方法以酶消化法原中图分类号：Ｒ９９６．１代培养ＳＤ大鼠ＡＴⅡ，纯化后培养３６ｈ，分别给予－

2、１文献标识码：Ａ不同浓度（０．５，１．０和２．０ｍｇ·Ｌ）的ＡＦＧ１处理。文章编号：１０００３００２（２００７）０２００９９０８ＡＦＧ１作用２４ｈ后，收集细胞和培养基上清液及细胞爬片，采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测细胞存活率、生物化学方法检测细胞培养上清液乳酸脱氢酶黄曲霉毒素Ｇ１（ａｆｌａｔｏｘｉｎｓＧ１，ＡＦＧ１）是黄曲霉（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｆｌａｖｕｓ）等真菌产生的具有致癌作用真菌（ＬＤＨ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活力、透射电镜方法观毒素之一，是我国恶性肿瘤高发区粮食污染的主要察ＡＴⅡ超微结构的改变、激光扫描共聚焦显微镜［１］真菌毒素之一。本研究室前期实验证实，长

3、期给（ＣＬＳＭ）检测Ｆｌｕｏ３／ＡＭ负载细胞内钙离子浓度［２－３］２＋予ＡＦＧ１可以诱发实验动物肺腺癌的发生。同（［Ｃａ］ｉ）、免疫细胞化学、ＣＬＳＭ及流式细胞术时研究发现，通过支气管一次性给予ＡＦＧ１作用对（ＦＣＭ）方法检测ＡＴⅡ特异分化标志物肺表面分泌大鼠肺组织和肺泡Ⅱ型上皮细胞（ｌｕｎｇａｌｖｅｏｌａｒｔｙｐｅ蛋白Ｃ（ＳＰＣ）表达情况。结果给予不同浓度Ⅱｃｅｌｌｓ，ＡＴⅡ）有一定的损伤作用，可降低肺组织ＡＦＧ１处理后，体外培养ＡＴⅡ细胞存活率分别为抗活性氧能力，上调肺泡细胞ＴＮＦαｍＲＮＡ的表（８８±３）％，（８０±９）％和（７２±８）％，明显低于溶剂［４］达。

4、进一步研究发现，支气管一次性给予ＡＦＧ１对照组（１０１±２）％（ｎ＝６，Ｐ＜０．０１）；培养上清液中作用可以降低大鼠肺组织中ＡＴⅡ特异分化标志物ＬＤＨ和ＡＫＰ活力明显增高；透射电镜观察可见上皮肺表面分泌蛋白Ｃ（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｐｒｏｔｅｉｎＣ，ＳＰＣ）的表细胞板层小体出现空化，线粒体肿胀、空泡化等损伤达（待另文发表）。性变化。ＣＬＳＭ结果显示，ＡＦＧ１０．５，１．０和２．０ｍｇ·－１为进一步研究ＡＦＧ１对可能作用的靶细胞ＡＴＬ处理组，ＡＴⅡ细胞内平均钙离子荧光强度分别Ⅱ的致损伤生物学作用，本研究采用酶消化法分离、为２００±２１，２２５±１４和２２９±１２，明显高于溶

5、剂对照纯化和培养大鼠ＡＴⅡ，给予不同浓度ＡＦＧ１作用于组１６１±２８（ｎ＝６，Ｐ＜０．０１），有明显浓度依赖关系原代培养的大鼠ＡＴⅡ，检测细胞存活率，培养基上（ｒ＝０．８４９）；免疫细胞化学、ＣＬＳＭ及ＦＣＭ检测结清中乳酸脱氢酶（ｌａｃｔａｔｅｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ，ＬＤＨ）和碱果显示ＡＦＧ１处理组ＡＴⅡＳＰＣ蛋白表达明显低于性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＫＰ）活力，细胞内溶剂对照组。结论ＡＦＧ１对体外培养的大鼠ＡＴ２＋钙离子浓度（［Ｃａ］ｉ），观察细胞超微结构变化，同２＋Ⅱ具有明显致损伤作用，同时增加细胞［Ｃａ］ｉ、降时分析在细胞水平上ＡＦ

6、Ｇ１对原代培养的ＡＴⅡ低ＳＰＣ蛋白的表达。ＳＰＣ蛋白表达的影响。收稿日期：２００６１１２７接受日期：２００７０１１３基金项目：国家科技部基础研究重大项目前期研究专１材料与方法项（２００１ＣＣＣ００５００）；河北省自然科学基金资助（３０１３５０）１．１动物和试剂作者简介：申海涛（１９７８－），男，博士研究生；张祥宏清洁级１５０～１６０ｇＳＤ大鼠，♂，由河北医科大（１９５７－），男，博士生导师，主要从事肿瘤病因与肿瘤病理研究。学动物实验中心提供；ＡＦＧ１、ＤＭＳＯ、噻唑蓝（ＭＴＴ）、联系作者Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｘｈ＠ｈｅｂｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎＴｅｌ：胰蛋白酶及Ｆｌ

7、ｕｏ３／ＡＭ（Ｓｉｇｍａ公司）；ＤＭＥＭ培养（０３１１）８６２６６２２９基（Ｇｉｂｃｏ公司）；ＢＣＩＰ／ＮＢＴ试剂盒（北京中山试剂·１００·ＣｈｉｎＪＰｈａｒｍａｃｏｌＴｏｘｉｃｏｌ２００７Ａｐｒ；２１（２）公司）；ＤＮａｓｅⅠ（华美公司）；大鼠ＩｇＧ（北京Ｓｏｌａｒ清和细胞爬片分别用于实验相关指标的检测。ｂｉｏ公司）；ＬＤＨ和ＡＫＰ检测试剂盒（南京建成生物１．４ＭＴＴ比色法检测ＡＴⅡ存活率工程研究所）；山羊抗小鼠ＳＰＣ单克隆抗体（Ｓａｎｔａ９６孔板培养的各孔ＡＴⅡ细胞，在实验结束前