小鼠肺泡ⅱ型上皮细胞的分离、原代培养

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1、分别采用传统与改良方法分离提取小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞严玉玲，周园红，叶红*(三峡大学第一临床医学院湖北宜昌443000)摘要：目的：建立可靠稳定的小鼠肺泡II上皮细胞（TypeIIalveolarepithelialcells，AECII）的分离、原代培养技术，为进一步研究AECII转分化分泌TGF-β1等物质与乳腺癌休眠细胞激活相关机制奠定基础。方法：通过传统的方法跟改良后方法分别得出提取细胞数量，体现改良方法的优势。结果：使用传统方法每只昆明种鼠可获得(4.18±2.30)×106个，使用改良后的方法每只昆明鼠可获得(1.20±0.2)×107个。资料采用SP

2、SS18.0软件分析处理,计量资料用±s表示，并采用独立样本t检验分析组间差异。检验水准α=0.05，即P＜0.05差异有统计学意义。结论：此改良方法可成功获得大量稳定的AECII，能满足进一步研究AECII转分化分泌TGF-β1等物质与乳腺癌休眠细胞激活相关机制奠定基础。IsolationandprimarycultureofTypeIIalveolarepithelialcellsfrommiceYANYu-ling，ZHOUYuan-hong，YEHong（FirstClinicalMedicalofChinaThreeGorgesUniversity,Y

3、ICHANG443000）Abstract:ItisnecessarytoestablishareliableandstableisolatedmouseTypeIIalveolarepithelialcells(AECII)linesandtheprimaryculturetechnologyforfurtherstudyingthemechanismoftrans-differentiationofAECIItosecretTGF-β1andothersubstancesassociatedwithbreastcancerdormantcellactivat

4、ionmechanism.Here,wecomparethenumberofcellsofconventionalmethodsandimprovedmethodstoreflecttheadvantagesofimprovedmethods.Theresults:Usingconventionalmethods,canbeobtainedfromeachmouseAECII(4.18±2.30)×106;Theachievedimprovedmethodcanbeobtained(1.20±0.2)×107.Weusethe±stobethemeasureme

5、ntdataandtherehaveastatisticallysignificantdifference,t=5.74,P<0.01BetweenthetwogroupsthroughtheTtestSPSS18.0softwaretoanalyze.Theachievedimprovedmethodoffersanimportanttooltothefiledoflungbiology.项目基金：国家自然基金青年基金项目（81402404）第一作者：严玉玲（1991-08），女，研究生在读，主要从事乳腺癌方向的研究，联系方式：15586374595，邮箱：8

6、27356082@qq.com。通讯作者：叶红*，教授，主任医师，从事妇科肿瘤的研究，E-mail:yehong998@126.com。关键字：AECII；传统方法；改良方法；原代培养Keywords:AECII；traditionalmethods；improvedmethods；primaryculture肺泡Ⅱ型上皮细胞（TypeIIalveolarepithelialcells，AECII）是肺上皮细胞的重要组成部分，具有合成和分泌表面活性物质、参与免疫反应以及转分化等多种功能[1]。在胚胎及胎儿时期AECII可增殖，但在成人期AECII呈高度分化状态，

7、正常情况下是不分裂增殖的[2]。当AECI细胞数量减少时，发现AECII可转分化为肺泡I型上皮细胞（TypeIalveolarepithelialcells，AECI），整个过程可能与TGFβ1传导的信号通路有关[3]，目前还没有能完全替代AECII的细胞株，为进一步研究AECII转分化分泌TGF-β1等物质与转移乳腺癌休眠细胞激活相关机制,需分离纯化AECII。1，材料与方法1.1材料健康雄性昆明种小鼠约20g，共10只（三峡大学实验动物中心）；DMEM培养基、血清（GIBCO）；胰蛋白酶、I型胶原酶、肝素钠、DnaseI（Solarbio）；小鼠IgG(Be

8、yotime)；红细胞裂