鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究

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1、江西农业大学学报2011，33(6):1164－1170http://xuebao．jxau．edu．cnActaAgriculturaeUniversitatisJiangxiensisE－mail:ndxb7775@sina．com鸡胚小肠上皮细胞的分离及原代培养研究1111*2*洪智敏，贾永杰，瞿明仁，黎观红，刘思国(1．江西农业大学/江西省高等学校动物营养与饲料重点实验室，江西南昌330045;2．中国农业科学院哈尔滨兽医研究所，黑龙江哈尔滨150001)摘要:取18日龄的SPF鸡胚，分别采用组织块培养法、胰蛋白酶

2、、胶原酶I和嗜热菌蛋白酶消化法分离和体外培养小肠上皮细胞。结果表明:组织块培养法所获得的上皮细胞纯度较低;胰蛋白酶消化后多为单细胞，细胞贴壁和生长能力较弱;胶原酶Ⅰ单独消化50min或嗜热菌蛋白酶单独消化110min以及胶原酶Ⅰ、嗜热菌蛋白酶联合消化后均可得到大量隐窝细胞团块，经低速离心去除单细胞、差速贴壁除去成纤维细胞，可获得较纯的上皮细胞。分离的细胞接种培养12～24h贴壁，48～72h细胞团中的细胞向四周蔓延，形成一群群的细胞集落，6～7d细胞汇合成片，成“铺路石样”，细胞多呈扁平多角状，椭圆状，单层生长，边界清晰，

3、互不重叠。经形态学观察、扫描电镜鉴定、碱性磷酸酶染色和免疫组化鉴定为上皮细胞。关键词:鸡小肠上皮细胞;分离;原代培养;鸡胚中图分类号:S831．1文献标志码:A文章编号:1000－2286(2011)06－1164－07IsolationandPrimaryCultureofChickenEmbryoSmallIntestinalEpithelialCells1111*2*HONGZhi-min，JIAYong-jie，QUMing-ren，LIGuan-hong，LIUSi-guo(1．KeyLaboratoryofJi

4、angxiUniversityforAnimalNutritionandFeed/JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，China;2．HarbinVeterinaryResearchInstituteofChineseAcademyofAgriculturalSci-ences，Harbin150001，China)Abstract:Eighteenday-oldchickenembryoswereusedtoinvestigatethemethodforisolati

5、onandprimarycultureofthechickenintestinalepithelialcells．Primarysmallintestinalepithelialcellsfromchickenembryowereisolatedbymeansoftissueculture，trypsindigestion，collagenaseIdigestionandthermolysindigestion，respectively．Theresultsindicatedthattheepithelialcellsob

6、tainedbytissueculturemethodhadlowpurity．Theymostlybecamesinglecellaftertrypsindigestion．Celladhesionandgrowthwereweak．AlargenumberofcryptcellclumpscouldbeobtainedbydigestingsmallintestinaltissuewithcollagenaseIfor50minorthermo-lysinfor110minorcollagenaseⅠ，thermoly

7、sinproteaseco-digestion．Singlecellsandfibroblastcellswereremovedbylow-speedcentrifugationanddifferentialvelocityadherent，andthuspurifedintestinalepithelialcellswereobtained．Theisolatedintestinalepithelialcellswereinoculatedintocellculturedishesandattachedreadilyto

8、culturedisheswithin12－24h，formingcoalescingcoloniesofepitheliumwithin48－72h．收稿日期:2011－05－11修回日期:2011－11－09基金项目:国家自然科学基金项目(30800791)和江西省青年科学家培养对象计划项目(赣科发