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1、原代乳小鼠心肌细胞的分离培养及鉴定程阔菊黄河杜智勇李洪杨天德﹡第三军医大学新桥医院麻醉科,重庆400037摘要：目的：原代乳小鼠心肌细胞培养方法的建立，评价心肌细胞的存活状况并鉴定心肌细胞纯度。方法：应用胰酶联合胶原酶共同消化3d内C57乳小鼠心脏，台盼蓝染色判断心肌细胞存活率，α-actin免疫荧光染色鉴定心肌细胞纯度。结果：利用3d内乳鼠心脏可成功培养原代小鼠心肌细胞，台盼蓝染色显示细胞存活率>95%，α-actin免疫荧光染色显示心肌细胞纯度达95%以上。结论：严格控制实验条件，可成功培养高存活率和高纯度的小鼠心肌细
2、胞。关键词：乳小鼠，心肌细胞，分离，纯化，培养，鉴定Isolation,cultureandidentificationofneonatalmousecardiomyocytesCHENGKuo-juHUANGHeDUZhi-yongLIHongYANGTian-deDepartmentofAnesthesiology,XinqiaoHospital,TheThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,China400037Abstract:Objective:Toestablisham
3、ethodtoisolate,cultureandidentifycardiomyocytesfromneonatalmouse,estimatethecardiomyocytessurvivalrate,andidentifythepurityofcardiomyocytes.Methods:NeonatalC57mouseheart(within3days)wasdigestedusingtrypsinandcollagenase.Cardiomyocytessurvivalratewasestimatedbytryp
4、anbluestaining,andcardiomyocytespuritywasidentifiedbyα-actinimmunofluorescencestaining.Results:Mousecardiomyocytescanbesuccessfullyisolatedandculturedusingneonatalmousewithin3days.Trypanbluestainingshowedcardiomyocytessurvivalratewas>95%,andcardiomyocytespuritywas
5、morethan95%demonstratedbyα-actinimmunofluorescencestaining.Conclusion:Underthestrictexperimentalconditions,mousecardiomyocytescanbesuccessfullyisolatedandculturedwithhighsurvivalrateandhighpurity.Keywords:neonatalmouse,cardiomyocytes,separation,purification,cultur
6、e,identification基金项目：国家自然科学基金面上项目(30871061)作者简介：程阔菊（1984-），女，四川达州人，药师，主要从事心肌保护方面的研究。E-mail:chengkuoju@163.com﹡通讯作者，杨天德，男，教授，博士生导师，主要从事心肌保护方面的研究。Tel：023-68755634,E-mail:31011@sina.com.各种基因敲除及转基因小鼠已广泛应用于心血管疾病动物模型的建立，已为心血管疾病机制的研究作出了巨大贡献。体外心肌细胞培养作为一种体外实验研究模型，可以排除神经、体液
7、的干扰独立的从细胞和分子水平研究心血管疾病的发生、发展机制，但由于小鼠心肌细胞的分离和培养比较困难，所以一直来限制了我们在细胞生物学水平对心血管疾病的深入研究。本实验室在以往的经验基础上，摸索出了一套成熟可行、简单可靠的小鼠心肌细胞培养方法，获得的心肌细胞存活率高和纯度高。本文对此培养方法做一简单介绍，并对其中的关键影响因素做详细的探讨。1.材料和方法1.1实验动物1～3d龄野生型C57新生乳鼠，SPF级，由第三军医大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(渝)2007-0003。1.2主要仪器与试剂显微眼用镊、眼科剪、显
8、微镊、显微剪（上海医疗器械集团有限公司手术器械厂），器械使用前清洗干净，并经高压蒸汽灭菌（121℃，20min）。二氧化碳培养箱(HealForce)、倒置显微镜(OLYMPUS)、超净工作台(苏净安泰)、低温台式离心机（Thermo）。小牛血清、DMEM/F12、胰酶、胶原酶Ⅱ（GIBCO），BrdU
