黄曲霉毒素g_1和il-6协同作用对肺泡ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其机制的研究

《黄曲霉毒素g_1和il-6协同作用对肺泡ⅱ型上皮细胞损伤的影响及其机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、授予单位代码10089学号或申请号20122628HebeiMedicalUniversity硕士学位论文科学学位黄曲霉毒素Gl和IL-6协同作用对肺泡II型上皮细胞损伤的影响及其机制的研究研究生：邵沛璐导师：张祥宏教授专业：病理学与病理生理学二级学院：基础医学院2015年3月河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师（或指导小组）的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获得的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名为单位河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产

2、权均归河北医科大学所有。否则，承担相应法律责任。研究生签名野玲导师签章二级学院领导盖章A》年、月“0'河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。1^%年月>日目录中文摘要…………………………………………………………………1英文摘要…………………………………………………………………6英文缩写…………………………………………………………………12研究论文黄曲霉毒素G1和IL-6协同作用对肺泡II型上皮细胞损伤的影响

3、及其机制的研究前言…………………………………………………………………14材料与方法…………………………………………………………15结果…………………………………………………………………26附图…………………………………………………………………31附表…………………………………………………………………42讨论…………………………………………………………………43结论…………………………………………………………………45参考文献……………………………………………………………46综述IL-6及其相关通路在肿瘤发生和发展中作用的研究进展……49致谢………………………………………………………………

4、………65个人简历…………………………………………………………………66中文摘要黄曲霉毒素G1和IL-6协同作用对肺泡II型上皮细胞损伤的影响及其机制的研究摘要目的：慢性炎症反应释放氧化介质和各种细胞因子，在恶性肿瘤发生中起重要作用。本实验室前期研究发现长期灌胃黄曲霉毒素G1（AFG1）诱导的慢性炎症反应在肺腺癌发生中起重要作用。慢性炎症反应可以造成肿瘤来源的靶细胞II型肺泡上皮细胞（AT-II）氧化应激损伤和增殖，在这个过程中我们发现炎症细胞因子TNF-α和IL-6在炎症肺组织中高表达。IL-6是目前发现的具有癌基因功能的炎症细胞因子，但在AFG1诱导的炎症微环境中，IL-6是否加剧A

5、FG1致AT-II细胞损伤作用还不清楚。为了揭示在AFG1诱导的炎症微环境中IL-6对AT-II细胞氧化应激损伤的影响，本研究体外培养具有人AT-II细胞特征的A549细胞，给予IL-6和AFG1共同作用，模拟IL-6和AFG1协同作用的慢性炎症微环境。探讨AFG1和IL-6联合作用对AFG1活化相关酶细胞色素P450（Cyp450）活性，以及A549细胞损伤的影响。方法：1细胞培养与处理具有人AT-II细胞特征的A549细胞培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml链霉素的RPMI-1640培养基中，37℃、5%CO2培养，细胞贴壁生长。选择对数生长期的细胞（传代后2

6、4h）随机分为溶剂对照组和实验组。实验组给予AFG1（4μg/ml）单独处理和AFG1（4μg/ml）与IL-6（20μg/ml）联合处理，溶剂对照组给予终浓度为0.08%的DMSO（每组设平行样本3个），继续培养24h收集细胞进行相关指标检测。2流式细胞术（FCM）采用流式细胞术（FCM）分别检测AFG1单独处理和AFG1与IL-6联合处理对A549细胞中活性氧生成的影响。3免疫组织化学（IHC）染色1中文摘要按照我研究组前期灌胃AFG1诱导NIH小鼠肺腺癌的动物造模方法，经口给予Balb/c小鼠灌胃AFG16个月（每周3次），停止灌胃AFG1。选择AFG1灌胃6个月的小鼠慢性炎症肺组

7、织标本，检测肺泡上皮细胞中与毒素代谢相关活化酶细胞色素P450亚型，Cyp1A2、Cyp2A6和Cyp2A13的表达情况。4蛋白免疫印记（Westernblot）采用蛋白免疫印记（Westernblot）方法分别检测AFG1单独处理和AFG1与IL-6联合处理对A549细胞的影响，检测氧化应激损伤相关蛋白SOD2、γH2AX、ATM和ATR的表达；检测细胞色素酶P450亚型，Cyp1A2、Cyp2A6和Cyp2A13的表达情况；检测