人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究

人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级?ShanxiUniversityofChineseMedicine硕士学位论文人参皂苷Rg3逆转人胆管癌细胞多药耐药性的实验研究ReversalofMultidruResistanceinHumanCholaniocarcinomaCellbyggGinsenosideR3g研究生姓名:马宏波导师姓名、职称:蔺涛副主任医师学科、专业名称:中医外科学研究方向:外科围手术期申请学位类型:硕士研究生二0—七年三月二十二曰山西中医学院学位论文

2、原创性声明本人郑重声明:所呈交的学位论文,是个人在导师的指导下,独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经特别加以注明引用的内容外,本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名:年月日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西中医学院有关保留使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版,允许被查阅和借阅。本人授权山西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采

3、用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:论文导师签名:年月日中文摘要目的:探讨人参皂苷Rg3逆转人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的耐药性。方法:人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立,主要采用阿霉素(ADM)持续接触浓度递增法,必要时结合高低浓度交替法诱导人胆管癌细胞QBC939产生多药耐药性(MDR)。将三种不同浓度的化疗药物,即环磷酰胺(CTX)、丝裂霉素(MMC)、5-氟尿嘧啶(5-FU)分别作用于QBC939及QBC939/ADM,用CCK-8法检测不同化疗药物的细胞

4、毒作用,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测MDR基因的表达水平,将得到的数据运用统计学分析,并得出结果,从而证明人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立。以中药人参的有效成分人参皂苷Rg3作为MDR逆转剂,逆转QBC939/ADM的MDR,用CCK-8法、流式细胞术、RT-PCR法检测其逆转作用。结果:证明人胆管癌多药耐药细胞株QBC939/ADM的建立:①CCK-8法检测三种化疗药物的细胞毒作用。将三种化疗药物:环磷酰胺(200µg/ml)、丝裂霉素(2.0µg/ml)、5-氟尿嘧啶(250µg/ml),作用于QBC93924小

5、时后,其OD值分别为:环磷酰胺组0.568±0.085、丝裂霉素组0.506±0.024、5-氟尿嘧啶组0.574±0.093;作用于QBC939/ADM24小时后,其OD值分别为:环磷酰胺组1.178±0.120、丝裂霉素组1.037±0.073、5-氟尿嘧啶组1.188±0.111;QBC939/ADM的细胞活性明显强于QBC939;二者相比较,P<0.05,差异有统计学意义;②流式细胞仪测定三种化疗药物作用于细胞的细胞凋亡率。将三种化疗药物:环磷酰胺(200µg/ml)、丝裂霉素(2.0µg/ml)、5-氟尿嘧啶(250µg/ml),分别作用

6、于QBC93948小时后,其细胞凋亡率分别为:环磷酰胺组(69.16±1.97)%、丝裂霉素组(59.45±1.74)%、5-氟尿嘧啶组(62.96±2.25)%;作用于QBC939/ADM48小时后,其细胞凋亡率分别为:环磷酰胺组(12.36±1.31)%、丝裂霉素组(9.20±1.12)%、5-氟尿嘧啶组(11.89±1.50)%;二者相比较,P<0.05,差异有统计学意义。测定人参的有效成分人参皂苷Rg3作为逆转剂,对QBC939/ADM的逆转作用:①CCK-8法测定三种化疗药物作用于对照组和实验组的细胞毒作用。对照组:将三种化疗药物:环磷酰

7、胺(200µg/ml)、丝裂霉素(2.0µg/ml)、5-氟尿嘧啶(250µg/ml),分别作用于QBC939/ADM24小时后,其OD值分别为:环磷酰胺组1.153±0.158、丝裂霉素组1.202±0.107、5-氟尿嘧啶组1.250±0.124;三种化疗药物分别联合人参皂苷Rg3作用于实验组的OD值分别为:环磷酰胺+人参皂苷Rg3组0.706±0.056、丝裂霉素+人参皂苷Rg3组0.748±0.105、5-氟尿嘧啶+人参皂苷Rg3组0.779±I0.093;实验组的细胞活性明显弱于对照组;二者相比较,P<0.05,差异有统计学意义;②流式细

8、胞术测定三种化疗药物作用于对照组和实验组的细胞凋亡率。将三种化疗药物:环磷酰胺(200µg/ml)、丝裂霉素(2.0µg/

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