补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎单核巨噬细胞的免疫调控研究

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1、中图分类号论文编号学科分类号密级ｔ？４么ｆ髮橥ＡｆＳｈａｎｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅｙ硕士学位论文补阳还五汤对实验性自身免疫性脑脊髓炎单核巨噬细胞的免疫调控研究ＩｍｍｕｎｏｒｅｇｕｌａｔｏｒｅｆｆｅｃｔｏｆＢｕａｎＨｕａｎｗｕＤｅｃｏｃｔｉｏｎｏｎＭｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｙｙｇＭａｃｒｏｐｈａｇｅｓｉｎｍｉｃｅｗｉｔｈｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｕｔｏｉｍｍｕｎｅｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ研

2、究生姓名：田倩倩导师姓名、职称：马存根教授尉杰忠副教授学科、专业名称：中医内科学研究方向：中医药脑病学研究申请学位类型：科学学位二０—七年三月十五曰山西中医药大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是个人在导师的指导下，独立进行研宄工作所取得的成果＾■除文中己经特别加以注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人

3、承担。论文作者签名：年上月＞口关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山西中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅ａ本人授权山西中医学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（保密论文在解密后应遵守此规定）论文作者签名：论文导师签名：山西中医药大学2017届硕士学位论文中文摘要目的：本课题以雌性C57BL/6小鼠为对象

4、，应用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35－55多肽（myelinoligodendrocyteglycoproteinpeptides,MOG35-55）对实验性自身免疫性脑脊髓炎（experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE）模型进行制备，运用补阳还五汤（BuyangHuanwudecoction，BYHWD）灌胃进行干预，观察对照组和治疗组的临床症状、病理变化及BYHWD对小鼠中枢神经系统（centralnervoussystem，CNS）脊髓、外周免疫系统脾脏

5、单核巨噬细胞的影响。探讨BYHWD治疗EAE的有效性及对单核巨噬细胞免疫调控的作用及机制。方法：雌性C57BL/6小鼠42只，用小鼠MOG35-55多肽免疫制备成EAE的模型，按照随机数字分配表将小鼠分为EAE对照组、BYHWD治疗组，每个组各有21只动物。在免疫后的第3天开始进行灌胃给药，EAE对照组予以自来水、BYHWD治疗组给予BYHWD，500μl/只/d（含原药1g），持续观察临床症状和体重变化。免疫后17天（p.i.17）各组统一处死9只动物，无菌分离脾脏，5只用于制备脾脏单个核细胞混悬

6、液，流式细胞术（FlowCytoMetry,FCM）检测脾脏单核巨噬细胞M1型和M2型细胞亚型；4只脾脏经脱水后制成冰冻切片进行免疫荧光组织化学染色，检测iNOS、Arginase-1的表达。脊髓冰冻切片进行HE染色观察炎性细胞浸润情况，罗氏染色观察脊髓髓鞘脱失比例，免疫荧光组织化学染色、Westernblot法检测脊髓巨噬细胞iNOS、TNF-α、Arginase-1及IL-10的表达。运用统计分析软件GraphpadPrism6.0对实验结果进行分析处理。结果：1.C57BL/6小鼠由MOG35

7、-55抗原乳剂免疫诱导后EAE小鼠模型成功建立。从平均起病时间来看，BYHWD组较EAE对照组而言，起病时间明显推迟，临床症状评分明显降低；同时，BYHWD治疗组可明显抑制EAE小鼠在发病期间的体重减轻（p<0.01）。2.BYHWD治疗后可减轻EAE小鼠脊髓的髓鞘脱失程度（p<0.05）。3.HE染色和免疫荧光组织化学染色观察到EAE脊髓有不同程度的炎性细胞浸润。BYHWD可以减轻CNSCD68+单核巨噬细胞及炎性细胞的浸润（p<0.05）。4.EAE小鼠经BYHWD治疗后，可显著抑制脊髓及脾组织

8、中巨噬细胞iNOS、I山西中医药大学2017届硕士学位论文TNF-α、CD16/32的表达，同时促进Arg-1、IL-10、CD206的表达（p<0.05）。结论：1.BYHWD对EAE具有较好的治疗效果，可以延缓EAE的发病程度，减轻EAE小鼠精神萎靡、食欲不振、四肢痿弱甚至瘫痪等中医“痿症”的临床症状。2.BYHWD可减轻EAE髓鞘脱失，抑制炎性细胞浸润，促进髓鞘再生。3.BYHWD促进EAE脊髓及脾组织中M1型巨噬细胞转化为M2型。其疗效机制可能与其抗炎、诱导巨