实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑CalpainⅠ表达及其临床意义.doc

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1、实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑CalpainⅠ表达及其临床意义【摘要】目的通过观察动物模型脑的钙蛋白酶(Calpain)Ⅰ表达的变化，探讨急性播散性脑脊髓炎的发病机制。方法①利用雌性Wistar大鼠建立自身免疫性脑脊髓炎（EAE）动物模型；②通过免疫组化染色动态观察EAE大鼠不同时段各组鼠脑内CalpainⅠ的分布及表达的变化情况。结果CalpainⅠ在发病后7d达高峰，且染色反应增强，与正常对照组相比有统计学意义（P<0.05）。结论EAE模型建立方法稳定、可靠，成功率高。CalpainⅠ在正常大鼠的中枢神经系统中广泛存在。EAE发病过程中，CalpainⅠ在鼠脑表达增高。【关键词】

2、实验性自身免疫性脑脊髓炎；钙蛋白酶；中枢神经系统【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheexpressionofCalpainⅠindifferentperiodsduringexperimentalauto-immuneencephalomyelitis(EAE)inWistarrats'brain.Method1.ToestablishEAEmodelusingfemaleWistarrats;2.Usingimmunohistochemicalstainingmethod,dynamicallyobservethedistributionandchange

3、sofexpressionindifferentperiodsinEAErats'brain.ResultsCalpainⅠreachedpeakat7daysafteronset,andstainingwasincreased,whichwasstatisticallysignificantcomparedwiththenormalcontrolgroup(P<0.05).ConclusionThemethodofestablishingEAEmodelisstable,reliable,andwithhighsuccessrate.CalpainⅠexistswidelyinthe

4、CNSofnormalrats.TheexpressionofCalpainⅠisincreasedduringthepathogenesisofEAEintheratbrain.【Keyword】Experimentalauto-immuneencephalomyelitis(EAE);Calpain;Centralnervoussystem（CNS）急性播散性脑脊髓炎（acutedisseminatedencephalomyeliti，ADEM）是以中枢神经系统（centralnevoussystem，CNS）白质的急性炎症性脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病，确切病因及发病机制迄今不明［

5、1］。实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）与人的ADEM临床、生化、免疫及病理等诸方面具有相同或相似的特征，目前已被国内外公认是研究ADEM的理想的动物模型［2］。2006-06～2008-02本科应用急性EAE模型动态观察EAE发病过程中不同时期的CalpainⅠ表达的变化，旨在探讨EAE发病的病理生理，为临床治疗ADEM提供理论基础，为Calpain抑制剂的应用时机、治疗持续时间等提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1一般资料5　　1.1材料　　1.1.1实验动物　　健康Wistar雌性大鼠100只，6～8周龄，体重150～200g；雌性豚鼠10只，体重300～400g，由中国医科大学实

6、验动物中心提供。　　1.1.2主要试剂及药品　　①完全福氏佐剂（CFA）：购自Sigma公司；百日咳疫苗原液（BPV）：购自北京生物制品研究所。②兔抗大鼠CalpainⅠ多克隆抗体，购于Abcam公司；Sp试剂盒和DAB显色盒均购于福建迈新公司。③多聚赖氨酸溶液：Sigma公司进口分装。用时蒸馏水1∶10稀释。　　1.2方法　　1.2.1完全抗原制备(EAE模型的抗原制备)　　取10只豚鼠称重后，按脑脊髓重量1g加生理盐水1mL的比例，冰浴中匀浆，再将匀浆液与等体积的完全福氏佐剂（CFA）充分混合，以无菌注射器及反复抽打制成油包水乳剂，作为抗原，4℃保存，12h内用完。　　1.2.2EAE模

7、型制备　　取20只Wistar大鼠分别称重、标号，正常饲养，不给予任何处理。将另80只Wistar大鼠分别称重、标号，按10%水合氯醛3mL/kg腹腔注射麻醉，无菌状态下以百日咳疫苗原液0.1mL/只（含2×1010个菌体）左后足背注射，以完全福氏佐剂（CFA）与豚鼠脑脊髓匀浆（GPSCH）混合液0.4mL/只四足垫注射。其中8只注射后7d做脑组织标本取材，为免疫后7d组。　　1.2.3EAE模型神经功能评分