阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织tim—3、tim—1表达影响

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1、阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠脑组织TIM—3、TIM—1表达影响【摘要】目的:观察阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentaiautoimmuneencephalomyelitis,EAE)Wistar大鼠的发病情况、组织病理变化及脑组织内T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-3(TIM-3)、T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白-1(TIM-1)表达水平的影响。方法:将30只雌性Wistar大鼠随机分为佐剂组、EAE组、阿托伐他汀组,以豚鼠脊髓匀浆(GPSCH)诱发制备大鼠EAE模型,并于给予GPSCH当日开始1次/d灌服0.1%PB

2、S溶液1.5ml/只(佐剂组和EAE组)和含阿托伐他汀的0.1%PBS溶液,1次/d,剂量为8mg/(kg-d),连续13d,观察EAE症状并评分,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测Tim-1mRNA、Tim-3mRNA在脑组织中的表达。结果:阿托伐他汀组发病率降低、临床症状减轻,体重下降减少(P〈0.05);与佐剂组比较,EAE组TIM-3mRNA明显上升(P<0.05),阿托伐他汀组TIM-3mRNA较EAE组明显下降(P<0.05);与佐剂组比较,EAE组TIM-1mRNA下降(P〈0.05),阿托伐他汀组TIM-1mRNA较EAE组

3、上升(P〈0.05)。结论:EAE大鼠TIM-3上升,TIM-1下降,提示其在EAE发病机制中发挥作用,通过下调TIM-3、上调TIM-1的表达,可能是阿托伐他汀对EAE保护作用机制之一。【关键词】实验性自身免疫性脑脊髓炎;多发性硬化;TIM-3;TIM-1;阿托伐他汀实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis,EAE)是以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特征的疾病,是研究MS的理想动物模型[1]。T细胞免疫球蛋白和黏液域蛋白(TIM)家族是一类具有免疫调节作用的蛋白,可以作为Th细胞的分化标志[

4、2]。TIM-3是TIM家族中的一员,Monney等[3]研究发现,在体内运用TIM-3特异性抗体使EAE小鼠疾病死亡率增加,中枢神经系统炎症病灶增多,增加和激活CDllb+细胞。TIM-1最先被发现与变应性哮喘的发生有关[4]oTIM-1选择性表达于Th2细胞上,在Thl细胞及Thl7细胞上没有表达[5]。目前研究提示,在人体中,TIM-1不仅与过敏性疾病和哮喘有关,在自身免疫性疾病中也起着调节作用,如在类风湿关节炎的产生与TIM-1的外显子4相关,C反应蛋白与类风湿因子的水平与TIM-1基因的启动子多态性相关[6]。在MS缓解期患者脑脊液单核细胞

5、上可检测到TIM-1mRNA的表达,提示TIM-1对MS的恢复具有有益作用,其机制可能与免疫耐受有关[7]。目前各种能够缓解EAE病情的免疫调节药物在MS的治疗作用仍在试验阶段,且存在相关的副作用及潜在的毒性作用[8]。最近发现,他汀类药物除了其调脂作用外,亦存在免疫调节作用使之用于治疗中枢神经系统脱髓鞘疾病,如MS的研究越来越多[9]。他汀类药物运用于MS以及类风湿关节炎等得临床试验也已经得到有前景的结果[10]o他汀类药物的免疫调节作用包括有保护血脑屏障的完整性[11],抑制中枢神经系统炎症细胞浸润[11],促进Thl细胞反应向Th2细胞反应偏移

6、等[9]。最近发现除外其免疫调节作用外,他汀类药物对EAE还具有神经保护和促进神经再生的作用[12]o本实验从免疫诱导第1天开始予以阿托伐他汀药物治疗,根据国外文献报道,选择8mg/(kg•d)作用治疗剂量,观察阿托伐他汀对EAE的治疗作用。并通过检测TIM-3及TIM-1mRNA的表达情况检测阿托伐他汀是否通过影响其表达对EAE起治疗作用。1材料与方法1.1实验动物Wistar大鼠30只,6〜8周龄,体重(200±20)g,雌性;豚鼠10只,300〜400g,雌雄不限。购于湖南农业大学动物科技学院实验动物养殖场。在中南大学湘雅二医院动物实验中心分笼

7、饲养,每笼5只。喂食本医院动物实验中心配置的大鼠饲料,饮自来水,保持室温(18±2)°C,相对湿度(50±10)%,人工光照时间12h/d,自动抽风,每日上午更换食、水和垫料1次,饲养观察3d,能正常进食和饮水者纳入实验用鼠。1.2主要试剂阿托伐他汀购自大连辉瑞制药有限公司,卡介苗(BCG)冻干粉购自北京生物制品研究所,医用羊毛脂购自重庆化学试剂厂,罗可沙尔坚牢蓝购自Sigma公司,RT-PCR试剂盒由Fermentas公司生产,EDTA、Tris购自Sigma公司,引物由上海生物工程技术有限公司生产。1.3抗原制备完全福氏佐剂(CFA)的配制:取医

8、用的石蜡油40ml,医用羊毛脂10g,于三角瓶内充分混合,高温灭菌30min,制成不完全福氏佐剂。将失活的卡

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