阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用

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1、中文摘要阿托伐他汀对实验性自身免疫性脑脊髓炎的治疗作用摘要目的；多发性硬化(multiplesdemsis，MS)是以中枢神经系统白质脱髓鞘病变为特点的自身免疫性疾病，由于其发病率较高，呈慢性病程且倾向于年轻人罹患，而成为最重要的神经系统疾病之一。但目前用于治疗MS的药物大多由于疗效局限、缺乏特异性、毒副作用大且使用不方便等原因而限制了其临床应用。因此在MS的理想动物模型一实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalautoimmuneencephalomyelitis，EAE)的基础上寻找疗

2、效可靠，不良反应小且廉价的药物是我们目前研究的主要方向。他汀类药物最初被作为有效而安全的降脂药物广泛应用于临床，随着人们研究的不断深入，其降脂以外的作用也不断被发现。近年来国外研究者进行了一系列人类免疫细胞的体外实验和多中心的临床研究均证实他汀类药物参与了免疫反应的多个环节对MS有治疗作用。但目前国内应用他汀类药物治疗EAE／MS的研究报道很少。本实验旨在建立成功的EAE模型，并在此基础上探讨不同剂量的阿托伐他汀对EAE的治疗作用及其可能的机制，为临床应用提供重要的理论依据和实用价值。方法：中文摘要

3、1动物分组：将100只6—8周龄雌性Wistar大鼠，体重180—2009，随机分为正常对照组10只，EAE模型组、小剂量治疗组(2mg／kg)、大剂量治疗组(8mg／kg)各30只。每组又随机分为14天、2l天、28天三个小组，每小组10只大鼠。2模型制备；将薪鲜豚鼠脊髓制成匀浆，加上完全福氏佐剂(completeFreundAdjuvant，CFA)，佐剂中所含卡介苗的剂量为6mg／ml，～并混合乳化后按0．5mg／只分别于大鼠四足掌胶质垫和背部皮下注射。治疗组于模型制备第一天起给予不同剂量的阿

4、托伐他汀灌胃治疗，药物每天一次持续给至动物处死时为止。3神经功能评分：于免疫诱导当日及免疫后每天对动物的体重变化、精神状态、活动情况进行观察，并对动物进行神经功能评分，采用Hooper的7分评分标准：O分：正常，1分：被毛不光整，尾部无力，2分：尾部瘫痪，3分；尾部瘫痪+后肢无力，4分：尾部瘫痪+后肢部分瘫痪，5分：后肢完全瘫痪，6分：四肢瘫痪，7分：濒死状态或死亡。4组织病理学：在动物麻醉状态下，快速取其脊髓中腰膨大处组织，4％多聚甲醛固定，石蜡包埋，组织切片，HE染色，光学显微镜下观察炎性细胞浸

5、润情况。．5免疫组织化学染色：取动物脊髓腰膨大处组织，石蜡包埋，做4gtm横断切片，经枸橼酸钠抗原修复，山羊血清封闭，加入MMP-9多克隆抗体，再经过二抗、三抗孵育后，DAB显色，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察MMP．9表达情况。6血清中m4含量测定：实验动物分别于14天，21天，28中文摘要天时经眼动脉取血，留取标本，室温静置1小时，离心留取血清，应用放射免疫方法对血清中玎L，4含量进行测定。结果：1动物发病率观察：EAE模型组、小剂量治疗组、大剂量治疗组的发病率分别为7

6、6．67％、53．33％、33．33％。经R*C的卡方检验，EAE模型组的发病率明显高于药物治疗组(P=0．008)。而两治疗组之间的发病率差异没有统计学意义(P=0．12)。2复发情况观察：对于28天组动物进行疾病复发情况的观察，每小组10只动物中EAE模型组有7只复发，小剂量组4只复发，大剂量组2只复发，统计分析显示大剂量治疗组的复发率明显低于EAE模型组(P=O．02)，小剂量治疗组复发率较EAE模型组虽有下降趋势，但其间差异无统计学意义(P=0．10)。3行为学观察3．1每只大鼠发病高峰期时

7、神经功能评分比较：EAE模型组各大鼠发病高峰期时神经功能评分普遍高于大剂量治疗组(P=0．03)，而与小剂量治疗组评分之间的差异没有统计学意义(P---0．13)。3．2各组大鼠总和神经功能评分比较：EAE模型组各大鼠总和神经功能评分明显高于大剂量治疗组(P---0．01)，而与小剂量治疗组评分之间的差异无统计学意义(P=0．11)。4组织病理学观察：在疾病初期，动物脊髓内即出现炎性细胞浸润，且炎性细胞数目的多少与疾病严重程度相一致。三组比较，EAE模型组炎症细胞浸润形成的血管袖套数目明显高于大剂量

8、治疗组(P----0．01)，而与小剂量治疗组之间袖套数中文摘要目的差异没有统计学意义(P=O．08)5脊髓组织中MMP．9表达比较t在疾病的不同时期MMP．9在组织中的表达含量无明显不同。三组比较，EAE模型组平均MMP．9阳性细胞数明显多于大剂量治疗组(P=0．001)，而与小剂量治疗组比较其间差异没有统计学差异(P=O．07)。6血清中lL4含量比较：动物血清中Ⅱ，4在恢复期时含量最高，发病高峰期时含量最低。三组比较显示，EAE模型组Ⅱ4含量明显低于大剂量治疗组