实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点.pdf

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1、16福建医科大学学报2015年2月第49卷第i期实验性自身免疫性脑脊髓炎鼠模型建立及其病理特点张健，曾育琦。，张静。，康德勇，黄天文。，陈晓春。“摘要：目的建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白多肽(MOG)诱发的实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠模型，并观察其病理特点。方法应用M0G。多肽加福氏完全佐剂皮下注射免疫雌性C56BL／6小鼠，观察其临床症状、病理改变及影像学变化。结果模型组小鼠发病时间为免疫后(12士4)d(8～16d)，发病率83．3，呈慢性单向过程；H～E染色模型鼠脊髓白质见大量炎症细胞浸润；罗克沙尔坚牢蓝染色显示，脊髓白质呈片状髓鞘脱失；电镜显示，髓

2、鞘内层呈板层剥脱，轴索肿胀，结构疏松；脊髓MRI检查可见髓内斑片状T2异常高信号。结论慢性EAE模型具有发病率高、死亡率低、模型稳定、重复性高、制作方便的特点，模型病理改变接近多发性硬化(MS)，是研究MS较为理想的动物模型。关键词：少突神经胶质／免疫学；髓鞘；糖蛋白类／免疫学；脑脊髓炎，自身免疫性，实验性；模型，动物中图分类号：R-332；R341．32；R392．11；R744．3；R971文献标志码：A文章编号：1672—4194(ZO15)01-O016-04多发性硬化(multiplesclerosis，MS)是一种病EAE模型组(—l2)。因不明的、

3、主要累及中枢神经系统白质的慢性炎性1．2试剂鼠源MOG35．多肽(MEVGwYRSPF—脱髓鞘疾病。基于人体实验所受的严格限制，研究SRVVHLYRNGK)由上海生物工程有限公司合成，者多用动物模型模拟MS发病机理并探讨其治疗方采用高效液相色谱仪(highperformanceliquid法。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimentalau—chromatography，HPLC)纯化，HPIC纯度toimmuneencephalomyelitis，EAE)可以由特异性>98。福氏完全佐剂(completefreund’Sadju—抗原主动免疫建立，也可以

4、由髓鞘特异T细胞被动vant，CFA)、百日咳毒素(pertussistoxin，PT)、罗克免疫建立。由于不同动物遗传背景及自身抗原的不沙尔坚牢蓝染料(1uxolfastblue，LFB)(美国Sigma同，造成EAE模型的不均一性。髓鞘少突胶质细公司)；灭活结核杆菌(mycobacteriumtuberculosis，胞糖蛋白(myelinoligodendrocyteglycoprotein，H37Ra)(美国Difco公司)。MOG)存在于髓鞘膜和少突胶质细胞最外层，具有1．3方法高度的免疫原性，研究表明，MOG及抗MOG抗体1．3。1EAE模型建立模型

5、组每只小鼠配制在MS发病中起重要作用。本研究参考国外相关文200,uL~L化剂(MOGn5_300Fg，MT500Fg)，双胁献的方法l_1]，建立MOG诱导慢性EAE模型，为进部皮下分4点注射免疫小鼠，每侧2点，每点50I一步研究MS奠定实验动物基础。乳化液_1]。对照组直接将PBS与CFA乳化，双胁部皮下分4点注射免疫小鼠。2组均于免疫的当日1材料与方法(0d)及免疫48h(第2d)腹腔内注射400ngPT。1．1动物8～1o周龄雌性C57BL／6小鼠[上海免疫后每天同一时间点对小鼠进行体质量测量及神斯莱克实验有限公司，许可证号SCXK(沪)2007一经功能

6、评分]：0为无症状；1为尾部瘫痪；2为小鼠ooos2，体质量约18～20g，随机分为磷酸盐缓冲液共济失调，后肢轻瘫；3为双后肢瘫痪；4为四肢瘫(phosphate_bufferedsa1ine，PBS)对照组(一8)和痪；5为死亡。1．3．2组织病理学检查小鼠在免疫诱导后第收稿日期：2014-1l_1920d(EAE高峰期)经3mI／kg10％水合氯醛腹腔基金项目：福建省临床重点专科建设项目作者单位：1．福建医科大学附属协和医院神经内科，福州注射麻醉，快速眼球取血后，取30ml4℃预冷的350001；4多聚甲醛／0．1mol·LPBS(pH一7．2)由左心2．福

7、建医科大学附属协和医院老年病科，福州350001；室内灌注，冰面上快速取小鼠腰膨大；置于预冷的3．福建省老年医学研究所，福州350001；4．福建省高校老化与变性病重点实验室，福州4多聚甲醛／O．1mol·LPBS4℃固定24h，脱350001；水，浸蜡，固定，石蜡包埋，沿脊髓横切面连续切片，5．福建医科大学附属协和医院病理科，福州350001作者简介：张健(1973一)，女，医学博士，副主任医师切片厚5“m，行H—E染色及IFB染色。通讯作者：陈晓春．Email：chenxc998@163．corn1．3．3透射电镜检查电镜标本取材后经3戊张健等：实验性自身免

8、疫性脑脊髓炎鼠模型建立及