旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立

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1、分类号：S852.73单位代码：10183旋研究生学号：2016854029密级：公开毛虫荧光免疫层析试纸吉林大学条的建硕士学位论文立（专业学位）旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立EstablishmentofimmunochromatographicstriptestfordiagnosisofTrichinellosis张作者姓名：张小波小波类别：兽医硕士领域（方向）：人兽共患病吉指导教师：刘明远教授林大培养单位：动物医学学院学2018年6月旋毛虫病荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立Establishmentofimmunochromatographicst

2、riptestfordiagnosisofTrichinellosis作者姓名：张小波领域（方向）：人兽共患病指导教师：刘明远教授类别：兽医硕士答辩日期：2018年6月7日中文摘要旋毛虫荧光免疫层析抗体检测试纸条的建立旋毛虫是一种重要的人兽共患寄生虫病，能严重危害人类的健康，给公共卫生安全带来极大威胁。因此，开发适用于现场的高效、灵敏的旋毛虫检测方法，能有效地缩短旋毛虫的检验时间，并为旋毛虫的防治提供方法和技术支持。在本研究RPMI1640培养液培养旋毛虫肌幼虫而获得肌幼虫排泄分泌（ES）抗原，并通过其检测不同感染条件下的猪阳性血清，所得结果作为试纸条检测准确性的参

3、照。同时应用肌幼虫ES抗原作为诊断抗原，通过对各种固相材料的选择和反应体系及反应条件的优化，建立了一种基于荧光微球标记山羊抗猪IgG的旋毛虫免疫层析试纸条，并应用于猪旋毛虫感染的血清学检测。经过体外培养得到浓度为2mg/ml的肌幼虫ES抗原。ES抗原经Westernblot鉴定可以与旋毛虫感染阳性猪血清发生特异性结合。利用喷涂有1mg/mlES抗原和0.625mg/ml兔抗山羊IgG的NC膜、喷涂有时间分辨荧光微球标记的山羊抗猪IgG的结合垫Ahistrom8964，并连同XQ-Y8样品垫、荧光专用黑色底板和吸水纸H5072进行旋毛虫荧光免疫层析试纸条的组装。该试纸

4、条可检测到1：100稀释的猪血清中的抗旋毛虫抗体，与抗猪囊虫、华支睾吸虫等血清无交叉反应；应用该试纸条与OIE认定的旋毛虫血清学标准检测方法酶联免疫吸附方法（ELISA）进行检测比较，结果表明试纸条的检测效果较标准血清学检测方法在感染剂量为1000条时晚10天，但不同感染量不同感染天数的阳性血清IgG抗体水平趋势大致相同。结果表明，本研究建立的旋毛虫荧光免疫层析试纸条具有良好的特异性、灵敏性和重复性等，能够快速检测出猪血清中的旋毛虫抗体，并可应用于现场初筛。关键词：旋毛虫；ES抗原；时间分辨荧光微球；试纸条IAbstractEstablishmentofimmuno

5、chromatographicstriptestforAntibodydiagnosisofTrichinellosisTrichinellosisisoneofmostimportantzoonosisthatposesathreattopublichealthandalsocauseslossestotheaquacultureindustry.Therefore,itisnecessarytodevelopdetectionrapidandsensitivemethodforthedetectionoftrichinellosiswhichprovidesst

6、rongsupportforthepreventionofTrichinellainfection.TheESantigenwasobtainedfrommusclelarvaeRPMI1640medium,andtheantibodiesinthepositiveserumfrompigswithvariouswormburdensweredetected.TheobtainedresultcanbeusedtotesttheaccuracyoftheteststripsforthedetectionofTrichinellaspiralis.Atthesamet

7、ime,theESantigenfrommusclelarvaewasusedasdiagnosticantigen.Throughtheselectionofvarioussolid-phasematerialsandoptimizationofreactionsystemandreactionconditions,aimmunochromatographicstripbasedonfluorescentmicrosphereslabeledgoatanti-porcineIgGforthedetectionofTrichinellaspiraliswases