猪圆环病毒2型抗体荧光免疫层析检测法.pdf

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1、ICS11.220B41团体标准T/CVMAX22—2019猪圆环病毒2型抗体荧光免疫层析检测法TheDetectionMethodofAntibodyforPorcineCircovirus2byHypersensitiveFluorescenceImmunoassay（征求意见稿）CVMA中国兽医协会2019—XX—XX发布2109—XX—XX实施中国兽医协会发布T/CVMAX22—2019前言本标准按照GB/T1.1-2009规则要求编写。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本

2、标准由四川省兽医协会提出。本标准由中国兽医协会归口。本标准起草单位：四川省动物疫病预防控制中心，成都微瑞生物科技有限公司。本标准主要起草人：王泽洲、陈斌、章建、周明忠、贺冬梅、阳爱国、张毅、陈弟诗、邓飞、邵靓、李丽、邱明双、丁梦蝶、吴宣。CVMA中国兽医协会T/CVMAX22—2019猪圆环病毒2型抗体荧光免疫层析检测法1范围本标准规定了猪圆环病毒2型抗体荧光免疫层析检测法的原理、仪器设备、操作步骤、结果分析。本标准适用于猪圆环病毒2型抗体水平的检测。2规范性引用文件文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅

3、注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB19489实验室生物安全通用要求GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输及规范3缩略语HFIA高敏荧光免疫快速检测法（TheHypersensitiveFluorescenceImmunoassayHFIA)4原理采用免疫夹心法和高敏荧光免疫层析CVMA法相结合技术，检测动物血清样本中的猪圆环病毒2型抗体中国兽医协会。当血清样本抗体与高敏荧光纳米微球标记的猪圆环病毒2型特异性抗原接触

4、反应后形成复合物，继续与硝酸纤维素膜上检测线包被的猪圆环病毒2型特异性抗原形成复合物反应，其余物质继续向前层析在C线捕获住“荧光标记鸡IgY+山羊抗鸡IgY”免疫结合物，最后用荧光检测仪读取检测卡上的荧光信号。5仪器、材料与试剂5.1仪器5.1.1高敏荧光分析仪：能在激发波长为(400±20)nm，检测波长为(615±10)nm条件下检测。5.1.2单道可调移液器（20～200μL）和（0.5～10μL）。T/CVMAX22—20195.1.3分析天平：0.0001g。5.1.4离心机。5.1.5冰箱。5.2材料5.2.1猪

5、圆环病毒2型抗体阳性血清。5.2.2猪圆环病毒2型抗体高敏荧光免疫分析法检测试剂卡（图1）：硝酸纤维膜上包被有猪圆环病毒2型特异性抗原，用于样品中猪圆环病毒2型抗体与高敏荧光纳米微球标记猪圆环病毒2型特异性抗原反应后，再与硝酸纤维素膜上包被的猪圆环病毒2型特异性抗原反应。图1猪圆环病毒2型抗体高敏荧光免疫分析法检测试剂卡示意图5.3试剂5.3.1水：按照GB/T6682中的要求，二级。CVMA5.3.2样品稀释液中国兽医协会(见附录A)。5.3.3高敏荧光纳米微球：荧光寿命≥400μs6样品采集与处理6.1样品的采集应按照N

6、Y/T541-2002《动物疫病实验室检测采样方法》中的规定进行，并做好安全防护。按常规方法用干燥、洁净的离心管或适当容器采集3～5mL血液。6.2样品的处理T/CVMAX22—2019血液样本用离心机3000r/m离心3min，血清量不少于500μL。6.3样品的贮存血清样本在2-8℃冷藏可保存24小时，如需长期保存应置-20℃或-80℃。7检测方法7.1样品稀释待检血清样本和猪圆环病毒2型抗体高敏荧光免疫分析法检测试剂卡从2-8℃取出，平衡到室温(25℃左右）。用样品稀释液将待测血清样本按1:50稀释。7.2加样从原包装

7、铝箔袋中取出猪圆环病毒II型抗体高敏荧光免疫分析法检测试剂卡，置于平净平坦的台面上，用移液器吸取离心管中事先准备好的已稀释好的检测样本垂直滴加80μL于加样孔内。7.3检测避光层析15min后用高敏荧光分析仪检测。CVMA8结果计算中国兽医协会B—高敏荧光分析仪读取标准溶液或样本溶液的检测卡上的荧光信号T/C值BO—高敏荧光分析仪读取稀释液检测卡上的荧光信号的T/C值以标准品B-BO值的对数为纵坐标，以猪圆环病毒2型抗体阳性血清效价对数为横坐标，绘制标准曲线图。将样本的荧光信号值代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的样

8、本中猪圆环病毒2型抗体效价。注：软件自带计算功能，能准确算出当前样本T/C值所对应的猪圆环病毒2型抗体效价。9判定标准T/CVMAX22—2019猪圆环病毒2型抗体效价：检测结果≤16抗体水平为阴性，≥24时抗体水平为阳性，16～24之间为可疑区。定量检测猪圆环病毒抗体的含量与样本效价成正