旋毛虫谷胱甘肽S-转移酶对巨噬细胞和树突状细胞的免疫调节研究

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1、分类号：Ｓ８５２．７３单位代码：１０１８３研究生学号：公开：２０１５８５２０４６密级吉林大学硕士学位论文学术学位（）旋毛虫谷胱甘肽Ｓ－转移酶对巨噬细胞和树突状细胞的免疫调节研究ｔｒ－ＣｈａｒａｃｅｉｚａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｏｆＴｒｉｃｈｉｎｅｌｌａｓｐｉｒａｌｉｓｏｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓａｎｄｄｅｎｔｒｉｔｉｃｃｅｌｌｓａｃｔｉｖｉｔｙ作者姓名：索佳文专业：兽医公共卫生研究方向：人兽共患病

2、指导教师：刘明远教授培养单位：动物医学学院２０１８年６月旋毛虫谷胱甘肽S-转移酶对巨噬细胞和树突状细胞的免疫调节研究CharacterizationofthefunctionofGlutathioneS-transferaseofTrichinellaspiralisonregulatingmacrophagesanddentriticcellsactivity作者姓名：索佳文专业名称：兽医公共卫生指导教师：刘明远教授学位类别：农学硕士答辩日期：2018年6月7日未经本论文作者的书面授权，依法收存和保管本论文书面版本、电子版本的任何

3、单位和个人，均不得对本论文的全部或部分内容进行任何形式的复制、修改、发行、出租、改编等有碍作者著作权的商业性使用（但纯学术性使用不在此限）。否则，应承担侵权的法律责任。吉林大学硕士学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交学位论文，是本人在指导教师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研宄做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明Ｄ。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担学位论文作者签名：Ｔｉ為架曰期：

4、年６月曰丨立摘要旋毛虫谷胱甘肽转移酶对巨噬细胞和树突状细胞的免疫调节研究旋毛虫（Trichinellaspiralis）是一种常见的食源性人畜共患寄生虫病。近年来发现，旋毛虫虫体粗体物和排泄分泌产物能够诱导宿主强烈的Th2型免疫反应，引起宿主免疫抑制，最终建立慢性感染从而达到长期寄生。研究者还发现虫体粗体物或排泄分泌产物中存在可调控宿主免疫细胞、诱导免疫耐受的具有活性的单一蛋白效应分子，但是其作用机制尚不清楚。因此，旋毛虫关键免疫调节分子的分离、鉴定及其调控机制的阐明十分重要。谷胱甘肽S-转移酶（GST）是生物体内重要的代谢酶之一，对致癌物，致突

5、变物和环境污染物等有害物质的代谢过程中发挥重要作用；同时也是蠕虫重要的解毒酶之一，几乎所有蠕虫的成虫期均表达有活性的GST，通过其解毒作用及修复功能等多种保护机制帮助蠕虫逃避宿主免疫，最终导致慢性感染。目前已有研究表明，旋毛虫谷胱甘肽S-转移酶（Ts-GST）存在于旋毛虫不同的发育时期，主要位于虫体杆状体，内表皮及生殖原基部位，表明其在旋毛虫寄生过程中可能发挥十分重要的作用。然而迄今为止，旋毛虫GST是否具有调节免疫细胞功能尚未报道。本课题首先参考GenBank公布的旋毛虫谷胱甘肽S-转移酶的基因序列（XM003371707.1）设计特异性引物，提取

6、旋毛虫肌幼虫的虫体RNA，RT-PCR获得目的片段。构建pColdI-rTs-GST重组表达质粒，转化至Rossetagami（DE3）大肠杆菌感受态细胞内，进行重组蛋白（rTs-GST）的可溶性表达。SDS-PAGE电泳结果显示，大约在25.7KD处出现一条蛋白条带，与预期大小一致。WesternBlot分析，纯化后的rTs-GST可被感染旋毛虫60天的猪血清特异性识别。结果表明，纯化后的rTs-GST具有良好的反应原性。其次，rTs-GST体外刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7，通过采用CCK-8法、流式细胞术、WesternBlot和ELISA等

7、实验技术分析rTs-GST对小鼠巨噬细胞极化I的影响。结果表明，rTs-GST可抑制由LPS诱导的炎性因子及效应分子iNOS的表达；并且rTs-GST单独作用可上调抗炎型细胞因子的表达和Arg1的转录和蛋白水平。流式结果进一步显示，rTs-GST可抑制LPS刺激后小鼠巨噬细胞RAW264.7表面分子CD16/32的表达；而rTs-GST单独作用可诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7高表达CD206。因此我们推测，rTs-GST作为旋毛虫有效的调控分子可诱导巨噬细胞向替代性活化巨噬细胞转化。最后，本研究分离小鼠骨髓源细胞树突状细胞（BMDC），体外经选择培

8、养基将其诱导分化为未成熟的树突状细胞（DC），流式细胞术鉴定纯度达85%以上，将rTs-GST体外单独作用或