旋毛虫感染对树突状细胞分化成熟的影响及其免疫机制研究

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1、分类号：Q958.9单位代码：10193密级：公开学号：2010714博士学位论文旋毛虫感染对树突状细胞分化成熟的影响及其免疫机制研究TheEffectsofTrichinellaspiralisinfectionontheDifferentiationandMaturationofDendriticCellsandtheImmunologicalMechanisms作者姓名：姜晶学位类别：农学博士专业名称：预防兽医学研究方向：动物寄生虫与寄生虫病学指导教师：赵权教授所在学院：动物科学技术学院2015年1

2、1月摘要旋毛形线虫，简称旋毛虫（Trichinella），是已知可以感染人类的最小的线虫寄生虫，具有独特的生命周期。由旋毛虫引起的旋毛虫病是较为常见的人兽共患寄生虫病之一，呈全球性分布且非常广泛。该病已严重影响公共卫生及食品安全，并对畜牧业经济也造成不容忽视的影响。树突状细胞（Dendriticcell,DC）作为专职的抗原呈递细胞（AntigenpresentingCells,APC），是病原微生物入侵宿主机体早期接触到的一类免疫细胞。DC于外周通常为非成熟状态，不仅具有较强的迁移能力，还能够高效摄取、

3、加工处理并呈递抗原，当有病原微生物入侵机体后便可刺激其成熟。成熟DCs可激活初始T细胞使其活化，活化的T细胞即具有启动、调控、并维持获得性免疫应答的功能。成熟的DCs还可以维持机体免疫耐受。旋毛虫在漫长的进化过程中，与宿主的免疫系统互相作用，并针对宿主免疫系统发展进化建立不同的免疫逃避和抑制机制，从而能够在宿主机体内长期存活。旋毛虫在宿主的骨骼肌中寄生是一种长期慢性感染状态，旋毛虫可以在宿主机体内一直存活下去直到宿主死亡，并且在宿主死后的数月至数年内仍具有感染性。在本研究中，我们通过体外培养小鼠骨髓来源树

4、突状细胞，利用旋毛虫肌幼虫排泄/分泌抗原（ES）进行刺激，检测其对DCs的影响。经检测我们发现由ES抗原作用的DCs+++通过流式细胞术分析CD11c阳性率在70%以上，CD40和B7共刺激因子（CD80、CD86）的表达量均有升高，且差异显著，表明ES刺激DC发育为不完全成熟状态，改变了DC的功能。在T淋巴细胞增殖反应实验中，DCs作为刺激细胞，当DCs的成熟受到抑制时，T细胞增殖水平也随之下降，进而抑制了T细胞介导的免疫反应，使旋毛虫产生免疫逃避而在宿主体内长期存活，此时机体处于慢性感染阶段。经旋毛虫

5、ES抗原作用的DCs分泌IL-10的水平有明显提高，而IL-12水平降低，表明旋毛虫的感染使宿主Th1/Th2平衡遭到破坏，使免疫反应向Th2方向分化。我们又通过流式细胞术在体内研究旋毛虫感染对小鼠DC诱导分化的影响，研究结果显示旋毛虫感染四周后，与对照组小鼠相比，感染组脾脏和局部粘膜淋巴结（肠系膜淋巴结MLN）中DC亚群CD11c+CD11b+CD8a-,CD11c+B220+CD8a+和CD11c+B220+CD8a-的比例提高（P＜0.05），表明小鼠在感染旋毛虫后，体内DCs主要以向这三个细胞亚群

6、分化为主。同时在旋毛虫感染后，小鼠脾脏和MLN中+++DC表面的成熟标志CD40、MHC-II和B7共刺激因子（CD80、CD86）的表达量显著增加（P＜0.05）；在小鼠感染旋毛虫三周后，感染组脾脏和MLN中DC表面的成熟标志+MHC-II和CD86的表达量下降，表明DC的抗原递呈功能在旋毛虫感染的慢性期受到了明I显的抑制。研究中我们还发现旋毛虫感染不同时期的小鼠DCs中MyD88的表达水平变化与旋毛虫感染宿主的生活周期基本一致。此外，我们在试验中发现RNA干扰可显著抑制感染旋毛虫不同时期小鼠DC的My

7、D88的表达，进而阻断TLR信号的转导。关键词：旋毛虫，排泄/分泌物，树突状细胞，分化成熟，免疫学机制IIAbstractTrichinellaspiralisarethesmallestnematodeparasiteofhumans,haveanunusuallifecycle,andareoneofthemostwidespreadandclinicallyimportantparasitesintheworld.Thediseasehasseriouslyaffectedpublichealtha

8、ndfoodsafety,andalsocausedtheimpacttotheanimalhusbandry.Dendriticcells(DC)belongtoprofessionalantigen-presentingcells(AntigenpresentingCells,APC),isthethefirstencounterofaclassofcellsaftertheinvasionofpathogenicmicr