il-27促进树突状细胞分化成熟及其作用机制实验的研究

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1、中文摘要lL_27促进树突状细胞分化成熟及其作用机制的实验研究摘要目的:观察在白介素一27(Interleukin.27,IL.27)单独作』.fj或与n吓.0t(Tumornecrosisfactor-a,TNF.0【)的联合作川的情况下,对健康成年人外刷血单个核细胞(Peripheralbloodmonocyte,PBMC)米源的树突状细胞(Dendriticcell,DC)分化、成熟和生物学功能的影响,并探讨其作用机制。方法:1.采集』lF常健康人外刷m15~20ml,川Ficoll.hypaque(葡聚糖一泛影葡胺)密度梯度离心法分离⋯外刷m单个核细胞

2、,加入基础细胞因子粒细胞-l’i噬细胞集落刺激l大I子(Granulocyte—macrophagecolonystimulatingfactor,GM.CSF)和IL.4体外培养5d,得到来成熟的DC。在第5d时加入刺激l大I子,并根据加入刺激闪子的4、=刚分为四个实验纰,分别为:阴性对照纰(Negative:小加入仃何刺激I大I子)、附陆对照匀【(TNF一131,:20ng/m1)、IL.27纠【(IL.27:20ng/m1)、TNF—a+II。.27身l(即双细胞网子匀【,TNF.0【:10ng/ml+II,一27:10ng/m1)。2.利川倒茕.{砂微

3、镜,分别观察培养命笫1d、3d、5d和7d符组未成熟及成熟DC的形态。3.通过磁珠分选的办法分离各纰DC。4.通过流式细胞术枪测符纰DC表而j£刺激分子CDIa、CD83和CD80、CD86以及细胞农而粕附分子ICAM.1的袭达水平。5.通过RT—PCR的办法枪测符纠【DC农而趋化l大I子受体CCR5、CCR7mRNA的农达。11I『况。6.川M,rS的办法检测符纰DC经丝裂霉素C处理后,刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。7.J1]EI。ISA的方法柃测符身【DC培养.1:消,ll细胞冈子IL.12、IFN吖的分泌水平。8.川Western.blot的办法柃测

4、符纽DC信·弓通路蛋白MAPKp38、中文摘要P.ST八T1和P-S—IA'I、3的含最。结果:1.光镜’卜.,在培养伞筇5人时,各纠【细胞形念均一,呈集落状生长,体移{较小且胞体较侧。培养伞笫7人时,II。.27组和’FNF—e+IL.27组DC呈现典璎的成熟形态学特征,胞体较人,细胞仲⋯伪足,表现出明.娃的毛刺样结构,与⋯性对照‘FNF一Ⅱ缬【相比无明娃差别;而Negative组细胞胞体较小,农而毛刺状突起较少,无典型DC形态。2.流式细胞结果.{u!乃÷,外刷m单个核细胞丁体外诱导培养第7d时,Negative纰、rrNF.0【纰、II/27组不nTNF

5、.e+IL.27组DC农而岁乓刺激分子CDla和CD83双阳性率分j5IJ为23.29+4.49%、42.76i3.50%、35.75+4.10%和52.49+2.65%,CD807HICD86双附陀率分别为22.66+3.20%、45.564-2.47%、39.06+1.61%$n54.10士0.46%。≥eIIIII。.27组【与TNF.o【匀【相I;LCDla和CD83、CD80和CD86的舣⋯性率均没有统计学意义(P>O.05),而TNF.a+IL.27组的双⋯性率“著高.-j。FNF一0L纰和IL.27纰,结果具有统计学意义(尸

6、tive纰、7ⅢF。Q约【、IL.27flL不n‘FNF—a+IL一27坌l[DC农而粘附分子ICAM.1的⋯-阡率分别为为21.84+0.64%、27.66士1.03%、28.47+0.94%、35.11-4-1.32%,≥ell'TNF.0【纠【、II。一27纠【不几TNF.a+IL.27组的⋯性率均高于Negative宝l[,结果具有统计学意义(尸O.05)。3.RT.PCR结果{【I!乃÷,Negative坌I【、TNF.o【约【、II。.27约【不口TNF.a+IL.27组DC农而

7、趋化I大I子受体CCR7mRNA的表达水平分别为3.09士0.18、4.14+0.08、3.98+0.09、4.75+0.1l,』㈧ITNF.仅约【、IL.27纠【和TNF.a+IL.27组CCR7mRNA的农达水平.{L12著高于Negative纰,统计学分析发现各组之问的比较均具有统计学意义(尸

8、结果具有统计学意义(尸

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