il-27促进树突状细胞分化成熟及其作用机制的实验研究

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1、河北医科大学硕士学位论文IL--27促进树突状细胞分化成熟及其作用机制的实验研究姓名：张璁申请学位级别：硕士专业：免疫学指导教师：单保恩；艾军201203中文摘要lL_27促进树突状细胞分化成熟及其作用机制的实验研究摘要目的：观察在白介素一27(Interleukin．27，IL．27)单独作』．fj或与n吓．0t(Tumornecrosisfactor-a，TNF．0【)的联合作川的情况下，对健康成年人外刷血单个核细胞(Peripheralbloodmonocyte，PBMC)米源的树突状细胞(Dend

2、riticcell，DC)分化、成熟和生物学功能的影响，并探讨其作用机制。方法：1．采集』lF常健康人外刷m15～20ml，川Ficoll．hypaque(葡聚糖一泛影葡胺)密度梯度离心法分离⋯外刷m单个核细胞，加入基础细胞因子粒细胞-l’i噬细胞集落刺激l大I子(Granulocyte—macrophagecolonystimulatingfactor,GM．CSF)和IL．4体外培养5d，得到来成熟的DC。在第5d时加入刺激l大I子，并根据加入刺激闪子的4、=刚分为四个实验纰，分别为：阴性对照纰(Ne

3、gative：小加入仃何刺激I大I子)、附陆对照匀【(TNF一131,：20ng／m1)、IL．27纠【(IL．27：20ng／m1)、TNF—a+II。．27身l(即双细胞网子匀【，TNF．0【：10ng／ml+II，一27：10ng／m1)。2．利川倒茕．{砂微镜，分别观察培养命笫1d、3d、5d和7d符组未成熟及成熟DC的形态。3．通过磁珠分选的办法分离各纰DC。4．通过流式细胞术枪测符纰DC表而j￡刺激分子CDIa、CD83和CD80、CD86以及细胞农而粕附分子ICAM．1的袭达水平。5．通过R

4、T—PCR的办法枪测符纠【DC农而趋化l大I子受体CCR5、CCR7mRNA的农达。11I『况。6．川M，rS的办法检测符纰DC经丝裂霉素C处理后，刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。7．J1]EI。ISA的方法柃测符身【DC培养．1：消，ll细胞冈子IL．12、IFN吖的分泌水平。8．川Western．blot的办法柃测符纽DC信·弓通路蛋白MAPKp38、中文摘要P．ST八T1和P-S—IA'I、3的含最。结果：1．光镜’卜．，在培养伞筇5人时，各纠【细胞形念均一，呈集落状生长，体移{较小且胞体较侧。培

5、养伞笫7人时，II。．27组和’FNF—e+IL．27组DC呈现典璎的成熟形态学特征，胞体较人，细胞仲⋯伪足，表现出明．娃的毛刺样结构，与⋯性对照‘FNF一Ⅱ缬【相比无明娃差别；而Negative组细胞胞体较小，农而毛刺状突起较少，无典型DC形态。2．流式细胞结果．{u!乃÷，外刷m单个核细胞丁体外诱导培养第7d时，Negative纰、rrNF．0【纰、II／27组不nTNF．e+IL．27组DC农而岁乓刺激分子CDla和CD83双阳性率分j5IJ为23．29+4．49％、42．76i3．50％、35．7

6、5+4．10％和52．49+2．65％，CD807HICD86双附陀率分别为22．66+3．20％、45．564-2．47％、39．06+1．61％$n54．10士0．46％。≥eIIIII。．27组【与TNF．o【匀【相I；LCDla和CD83、CD80和CD86的舣⋯性率均没有统计学意义(P>O．05)，而TNF．a+IL．27组的双⋯性率“著高．-j。FNF一0L纰和IL．27纰，结果具有统计学意义(尸

7、[DC农而粘附分子ICAM．1的⋯-阡率分别为为21．84+0．64％、27．66士1．03％、28．47+0．94％、35．11-4-1．32％，≥ell'TNF．0【纠【、II。一27纠【不几TNF．a+IL．27组的⋯性率均高于Negative宝l[，结果具有统计学意义(尸O．05)。3．RT．PCR结果{【I!乃÷，Negative坌I【、TNF．o【约【、II。．27约【不口TNF．a+IL．27组DC农而趋化I大I子受体CC

8、R7mRNA的表达水平分别为3．09士0．18、4．14+0．08、3．98+0．09、4．75+0．1l，』㈧ITNF．仅约【、IL．27纠【和TNF．a+IL．27组CCR7mRNA的农达水平．{L12著高于Negative纰，统计学分析发现各组之问的比较均具有统计学意义(尸