伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB-z66克隆表达及其多克隆抗体制备

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1、伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB：z66克隆表达及其多克隆抗体制备作者：张海方高宇琳黄新祥生秀梅徐顺高许化溪【摘要】目的：克隆表达H：z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB：z66,并纯化制备相应的多克隆抗体。方法：利用PCR技术从H：z66阳性伤寒沙门菌基因组DNA中得到鞭毛素基因fljB：z66,将该基因克隆到表达载体pET28a(+)上并在大肠埃希菌JM109中进行表达；fljB：z66的表达产物经Ni柱纯化后作为抗原免疫兔以制备多克隆抗体。结果：经PCR及序列分析证实，伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB：z66被成功导入表达载体pET28a(+),并在大肠埃希菌JM109

2、中获得了高效表达，以此作为抗原成功制备了兔抗z66的多克隆抗体。结论：成功克隆表达了H：z66阳性伤寒沙门菌鞭毛素基因fljB：z66,并制备了相应的多克隆抗体，为今后深入研究H：z66阳性伤寒沙门菌的单向相变换机制奠定了基础。【关键词】伤寒沙门菌；flj£：z66；多克隆抗体[Abstract]Objective：Tocloneandexpresstheflagellingenef1jB：z66ofH：z66positiveSalmonellaentericaseroverTyphi,andpreparetheantiz66polyclonalantibodies・M

3、ethods：Specificprimersweredesignedtoamplifytheflagellingenef1jB：z66fromthechromosomeDNAofH：z66positiveSalmonellaentericaseroverTyphiGIFU10007.TheampliconwasinsertedintotheexpressionvectorpET28a(+),whichwasthentransferredtoE.coliJM109tobeexpressed.TherecombinantproteinFljBHis6waspurifiedw

4、ithNiTEDpackedcolumnandwasusedasimmunogentopreparethepolyclonalantibody.Results：PCRandsequencinganalysisdemonstratedthattheflagellingenef1jB：z66ofH：z66positiveSalmonellaentericaseroverTyphiwasinsertedintothevectorpET28a(+)andwasexpressedhighlyinE.coliJM109.Therabbitantiz66polyclonalantib

5、odywaspreparedsuccessfully.Conclusion:ThisstudywasafoundationtoresearchthemechanismunderlyingthetheunidirectionalflagellarphasevariationofH：z66positiveSalmonellaentericaseroverTyphi.[Keywords]SalmonellaentericaseroverTyphi；f1jB：z66；polyclonalantibody伤寒沙门菌(SalmonellaentericaserovarTyphi)是

6、沙门菌属中一种重要的人类肠道致病菌。鞭毛(flagella)是细菌的动力装置，也是沙门菌的一种重要毒性因子［1］。沙门菌鞭毛可分为基体、弯钩和细丝三部分。基体部被包埋在细菌内外膜中，有中央小管。细丝部在菌体外侧通过弯钩部和基体部相连，主要由一种称之为鞭毛素(flagellin)的蛋白质构成。大多数的鞭毛抗原血清型如鼠伤寒沙门菌(SalmonellaentericaserovarTyphimuriuni)有两种不同的鞭毛素编码基因，位于染色体不同部位，称之为两相菌株(biphasicstrain),常以fliC和fljB表示其一、二相鞭毛素基因。1981年Guinee等［

7、2］在伤寒沙门菌中发现一种新的z66鞭毛抗原。2004年Huang等［3］发现伤寒沙门菌z66抗原的编码基因具有二相鞭毛素基因的结构特征，即存在fljBA样基因簇结构。H：z66阳性伤寒沙门菌只能从z66抗原表达转为d或j抗原表达，为单向不可逆变化［4］。最近研究表明，z66抗原的编码基因位于一罕见的线性质粒中，而且这种单向相变换是与缺失了线性质粒含fljBA的2.7kb末端区域有关［5,6］,但造成这种缺失的机制尚不明确。我们推测鞭毛与相应的抗体结合后，可以启动胞内一系列基因表达调节，最终通过某些关键基因的表达改变，致线性质粒缺失含fl