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1、PCR法在检测乙型肝炎病毒DNA特征序列的应用摘要乙型肝炎是一种极为普遍的流行病。目前，全世界儿乎有5%的人口感染了乙肝病毒，而口超过三亿五千万的人是慢性乙肝病毒的携带者。在早期肝癌病例中，多达80%是由于乙肝病毒的感染造成的。因此，乙型肝炎病毒的预防和诊断显得格外迫切。寻找一种高效、简便的检测手段是解决此问题的关键。传统的检测乙肝病毒的方法是酶联免疫反应，它检测的是人体对IIBV的免疫反应状态,这种检测手段灵敏度低且在病毒感染的窗口期容易出现漏诊。而聚仑酶链式反应则从病毒基因水平检测乙肝病毒，由于核酸是病毒感染的标志并早于特异性蛋白质出现在血液循环
2、中，从理论上讲血液中只要有一个HBVDNA分子，PCR技术就可将其检出。本研究从经ELISA检测为阳性和阴性的血清中利用碱裂解法提取HBVDNA,然后根据GenBank所查的HBVprecore-core片段、X基因片段、preS2/S片段的保守序列，应用引物设计软件设计了3对引物，利用PCR法扩增目的基因，并対PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳以及紫外检测。实验结果表明，利用其屮的1对引物(sense:5'・CCTGCTGGTGGCTCCAGT・3'；anti-sense:5,-GATGAGGCATAGCAGCAGGAT-3^),以乙肝病毒携带者血清
3、中的HBVDNA为模板，成功扩增出了对应的DNA序列。2.0%的琼脂糖凝胶电泳显示该序列长度为375bp,与预期分了量大小一致。利用该对引物建立了检测HBVDNA特征序列的PCR体系，该体系的血清学实验结果分别与传统的EL1SA方法及PCR商品试剂盒的反应结果进行了対比，结果显示该实验结果与PCR商品试剂盒的反应结果吻合且该检测方法比传统的ELISA方法灵敏。因此，该PCR体系可使HBV的窗口期大幅缩短，具有早期、快速、敏感和特界等优点，在临床上有一定的实用价值。关键词乙肝病毒特征序列酶联免疫反应聚合酶链式反应琼脂糖凝胶电泳Theapplicatio
4、nofPCRindetectingfeaturesequencesofHepatitisBVirusDNAAbstractHepatitisBisawidespreaddiseaseofimportantepidemiologicsignificance.Nearly5%oftheworldpopulationiscurrentlyinfectedwithhepatitisBvirus(HBV)andmorethan350millionarechroniccarriersofHBVworldwide.InfectionbyHBVisthecauseo
5、fupto80%ofcasesofprimarylivercancer,thesinglemostimportantcauseofcancermortalityintheworld.Therefore,itisimperativetopreventanddetectHBVbutsearchingforahighefficientandsimplemethodisthekeytosolvethisproblem.ELISAistheconventionalmethodofdetectingHBV,whichdetectsimmunereactionst
6、ateofhumanbeingsagainstHBV.Thismethodhasthedisadvantageoflowsensitivityandmakingmisdiagnosiseasilyinthewindowperiodsonvirusinfection.However,thetechniqueofPCRcandetectHBVfromthelevelofgene.Becausenucleicacidsarethesignofvirusinfectionandcanappearinbloodcirculationearlierthanvir
7、usprotein,theoretically,itcanbedetectedsimplybyPCRonlyifthereisonestrandofHBVDNAintheblood.Inthisstudy,weextractedHBVDNAbymeansofalkalinelysesmethodfromtheseropositiveandseronegativeseradiagnosedbyELISA,thenaccordingtoHBVprecore-corefragment,Xgenefragment,preS2/Sfragmentconserv
8、ativesequencesinGenBank,designedthreepairsofrelevantpr
