GBT19915.2-2005 猪链球菌 2型分离鉴定操作规程 - 下载地址.pdf

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1、ICS07.100.30C53药黔中华人民共和国国家标准GB/T19915.2-2005猪链球菌2型分离鉴定操作规程MethodsfordetectionofStreptococcussuistype22005-09-27发布2005-11-01实施率督留智臀暴嘘臀缝臀臀暴发“GB/T19915.2-2005前门猪链球菌2型是链球菌属的成员，其致病菌株可致猪链球菌病，引起猪败血症、脑膜炎等。人可通过伤口感染该菌，并导致发病和死亡。建立准确、可靠的检测方法是诊断、控制和预防该菌引致的猪链球菌病的迫切要求。本标

2、准是采用经典的细菌学鉴定方法并结合现代分子生物学技术制定的。本标准的附录A为资料性附录，附录B为规范性附录。本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。本标准由南京农业大学、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局和中国检验检疫科学院负责起草。本标准主要起草人：陆承平、姚火春、陈国强、张敬友、张常印、唐泰山、姜众、王凯民、林祥梅、韩雪清、吴绍强、刘建、贾广乐、梅琳。本标准为首次发布。GB/T19915.2-2005猪链球菌2型分离鉴定操作规程1范围本标准规定了猪链球菌2型分离鉴定的

3、操作方法。本标准适用于猪及其产品中猪链球菌2型的分离鉴定，也可用于送检菌株的鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂GB/T6682-1992分析实验室用水规格和试验方法GB/T19915.3猪链球菌2型PCR定型

4、检测技术GB/T19915.4猪链球菌2型三重PCR检测方法GB/T19915.5猪链球菌2型多重PCR检测方法GB/T19915.7猪链球菌2型荧光PCR检测方法GB/T19915.8猪链球菌2型毒力因子荧光PCR检测方法GB/T19915.9猪链球菌2型溶血素基因PCR检测方法3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1猪链球菌2型Streptococcussuistype2猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌，根据其荚膜多糖抗原的差异，可分为1-34及1/2共35个血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血

5、清型，不仅对猪致病性很强，而且可以感染特定的人群，是一种重要的人畜共患病病原菌。4操作规程4.1方法概要检验程序的流程示意图见附录A（资料性附录）。4.2试剂和材料除另有规定，所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682-1992的蒸馏水。各种培养基的制备方法见附录B（规范性附录）。4.3仪器和设备4.3.1匀质器和匀质杯。4.3.2天平：称量范围0g-1000g，读数精度0.1go4.3.3培养箱：36℃士10C。4.3.4恒温水浴锅。GB/T19915.2-20054.4步骤4.4.1样品采集对病猪，最

6、急性和急性病例可无菌采集死亡猪的心、肝、肺、肾、脾脏、淋巴结等组织，慢性病例如关节炎型一般采取关节液及周围组织；对活猪可采取扁桃体拭子、鼻腔拭子。4.4.2分离培养4.4.2.1送检菌株的分离划线接种于普通琼脂绵羊血平板，36℃士1℃培养24h士2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h士2h，使之形成单个菌落，以供鉴定用。4.4.2.2病料的分离和触片检查用经火焰灭菌并冷却的接种环蘸取病料内部组织后划线接种于普通琼脂绵羊血平板，于36℃士1℃培养24h士2h，如菌落生长缓慢，可延长至48h士2h后观察。同时取病

7、料做组织触片，姬姆萨染色（按GB/T4789.28的方法进行染色）后镜检，如见球菌则表明病料中可能含有链球菌。4.4.2.3扁桃体和鼻腔拭子的分离扁桃体和鼻腔拭子样品加人到含有5mI,灭菌的选择性THB增菌液（见第B.4章）的试管中，于36℃士1℃培养24h士2h后，划线接种于选择性普通琼脂绵羊血平板（见第B.2章）。4.4.2.4动物产品的均质、增菌和分离以无菌操作取检样25g，加人装有225ml,灭菌选择性THB增菌液（见第B.4章）的广口瓶内，均质，于36℃士1℃培养24h士2h后，划线接种于选择性普

8、通琼脂绵羊血平板（见第B.2章）。4.4.3初步鉴定猪链球菌2型在37℃培养24h后，在普通琼脂绵羊血平板和选择性普通琼脂绵羊血平板上形成圆形、微凸、表面光滑、湿润、边缘整齐、半透明的菌落，直径约0.3mm-1mm，大多数菌株呈a溶血，部分菌株产生R溶血。将可疑菌落做革兰氏染色和过氧化氢酶试验。本菌为革兰氏阳性球菌，菌体直径约1PLm，固体培养物以双球菌为多，少量呈3个～5个排列的短链，液体培养物以链状为主，无芽