猪链球菌的分离鉴定及2型猪链球菌基因芯片检测技术的试验研究

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1、河南农业大学硕士学位论文猪链球菌的分离鉴定及2型猪链球菌基因芯片检测技术的试验研究姓名：刘玲玲申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：李文刚201206河南农业大学2012届硕士学位论文摘要猪链球菌病是由链球菌感染所引起的猪的一类疾病的总称。该病分布范同极J、，世界各地均有发生。白201{j=纪50年代初期证实以来，荷兰、英国、美国等世界许多国家先后报道了猪链球菌病。由于链球菌血清型众多，抗原结构复杂，该病严重影响各国养猪业的发展，尤其是对高密度的养猪场危害更人，给养猪业造成了巨人的经济损火，受剑越来越多的重视。近儿年，我国猪链球菌病的发生和

2、危害日趋严重，除曲藏等少数地区尚未发现该病外，人多数省、市、自治区均有不同群度的发生与流行，并引起从业人员感染和夕匕亡，严重威胁了人类公共甲生，冈此建立一种新型、快速、准确的猪链球菌检测方法就尤为重要。基冈芯片是生物技术与电子芯片融合的结品，是由l古J定丁

3、吲相载体表面的核茁酸阵列构成的一种新犁微型器件，通过设计针对目的基冈的探针，与被检测基冈的碱基序列互补匹配，可快速、准确地检测到目的基冈，川丁-动物疫病的诊断。由丁

4、其快速、微鼙、准确的应用优点，止在成为新一代的白动化疫病检测I：具。本研究采州微生物学、血清!学、PCR扩增和序列测定相结合的方

5、法，对病料中的猪链球菌进行分型鉴定，为实施科学有效的猪链球菌防控措施提供依据。本研究通过2型标准菌株特异性探针制作基冈芯片，将被检样品在PCR过程中心Cy3标记，得到的DNA产物与芯片杂交，达到检洲02I!链球菌的目的，建立2开!猪链球菌基冈芯片检测方法；同时通过研究不同靶探针浓度利杂交时间等对榆测结果的影响，确＼、，：最佳反应条件为42。C水浴锅中温浴30min，探针浓度在5uM／L时即可得到较好的杂交信号；本研究制备的猪链球菌2型基冈芯片，可以成功地检测到猪链球菌2型特异区基冈，荧光信号清晰，敏感性高，实际应用效果好，是一种检山率高的诊断方法

6、。该方法不仅为实现多种病原体在同一张芯片上进行检测奠定基础，同时也为其他致病菌应川基冈芯片方法检测提供了理论依据。总之，本研究将基冈芯片技术应川丁．动物疫病的检测，成功建立了2型猪链球菌基冈芯片检测技术平台，解决了疫病检测中的难题，具有重人的埋论意义利应川价值。为今后利用基冈芯片技术开展动物瘦情诊断秆I研究提供理论依据，也为控制和消灭疫情奠定基础。关键词：猪链球菌；基冈芯片；不对称PCR；芯片杂交；检洲1河南农业大学2012届硕士学位论文ExperimentalresearchonseparationandidentificationofStre

7、ptococcusSuisandgenechipdetectiontechniquesofStreptococcusSuisserotype2Supervisor：Prof．LiWengangMasterCandidate：LiuLing—lingABSTRACT：Streptococcussuisisageneraltermfordiseaseofpigscausedbystreptococcalbacteria．Averywidedistributionrangeofthediseasehasoccurredaroundtheworld．Th

8、eNetherlands，UnitedKingdom，theUnitedStatesandothercountriesaroundtheworldhavereportedtheStreptococcusSuissinceconfirmedinearly1950s．Thediseaseseriouslyaffectedthedevelopmentoftheeverynationalpigindustry，especiallyforhigh—densitypigfarms，becauseStreptococcusSuishavemanyserotyp

9、esandcomplexityoftheantigenicstructure．Thediseasehascausedtremendouseconomiclossestotheswineindustryandreceivedmoreandmoreattention．Inrecentyears，China’SStreptococcusSuisbecomesmoreandmoreseriousinadditiontoTibetandotherregionswherehavenotyetfoundthedisease．Thediseasehavediff

10、erentlevelsofoccurrenceandepidemicsinmostoftheprovinces，municipaliti