茶叶中氨基酸总量的快速测定

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1、茶叶中氨基酸总量的快速测定─茚三酮比色法制作人：汪小钢实验目的茶叶中氨基酸是茶汤的主要成分，它对茶汤的鲜甜味有重要作用，与茶叶的品质呈高度的正相关。此外，在茶叶加工过程中氨基酸在热力等作用下通过美拉德反应、Strecker降解等形成醛类等香气物质，从而影响茶叶品质。因此氨基酸是评判茶叶品质的一个重要指标。实验原理茶叶中氨基酸在缓冲溶液中与茚三酮同时加热，α-氨基氮与茚三酮形成紫色的络合物，紫色的深浅与氨基酸含量呈正相关。其反应机理如下：试剂索伦逊氏缓冲溶液（pH8.04）：A：称取磷酸二氢钾2.268克，用水溶解并定容至250

2、毫升；B：称取Na2HPO4·2H2O11.878克（Na2HPO4取9.467克），用水溶解并定容至1000毫升；取A液0.5毫升加B液9.5毫升即配成约pH8.04的缓冲液。具体用量可按此比例配制。茚三酮试剂：取1克茚三酮加25毫升水和40毫克氯化亚锡（SnCl2·2H2O）拌匀过滤，滤液在暗处存放一昼夜，定容至50毫升。存于暗处，可用数月。主要仪器分光光度计/吸滤装置/水浴锅测定方法（I）─标准曲线制作准确称取茶氨酸（或谷氨酸）100毫克溶于100毫升水中，然后用水稀释成如下浓度：40微克/毫升、80微克/毫升、160微

3、克/毫升、240微克/毫升、320微克/毫升。分别移取以上各浓度溶液1.0毫升置于25毫升容量瓶中，加0.5毫升缓冲液，再加茚三酮显色剂0.5毫升，在沸水浴中加热15分钟，待冷却后加水定容至25毫升。放置10～15分钟，于波长570nm处，用1.0厘米比色杯，测定其吸光度A。以A值为纵坐标，氨基酸浓度（微克/毫升）为横坐标作图，得标准曲线并可求得线性回归方程。测定方法（II）─茶叶中含量的测定称取3.0000克左右磨碎茶样，加沸水450毫升在沸水浴中浸提45分钟，每隔10分钟摇瓶一次，趁热过滤，冷却后定容至500毫升得供试液。

4、取试液1.0毫升置于25毫升容量瓶中，加0.5毫升缓冲液，再加茚三酮显色剂0.5毫升，在沸水浴中加热15分钟，待冷却后加水定容至25毫升。放置10～15分钟，于波长570nm处，用1.0厘米比色杯，测定其吸光度。结果计算式中：C─根据A值由线性回归方程求得的浓度（微克/毫升）V─样品总体积的毫升数V1─被测液毫升数注意事项如对测定结果准确度要求不高，可以用下式计算茶叶中氨基酸的含量，不需要制作标准曲线。在水浴中加热时，必须将容量瓶球状部分浸入沸水中，严格控制时间（15分钟）和温度（沸腾），比色时间必须在1～2小时内完成，否则将

5、影响测定结果。注意事项茚三酮有时包装不好或放置不当，常呈微红色，影响比色测定，故需重结晶，进行纯化后方可应用。纯化方法：将5克茚三酮溶于15毫升热水中，加入0.25克活性炭，轻轻摇动，若溶液太浓不易操作可酌量加入5～10毫升水，30分钟后用滤纸过滤，滤液放在冰箱内过夜，次晨即有黄白色结晶析出，过滤后，再用1毫升水洗涤结晶，然后置于干燥器中干燥，最后装入棕色玻璃瓶内保存。多酚类物质对氨基酸测定有一定影响，除去多酚类物质再用茚三酮显色定量，结果比较稳定可靠。去除多酚类物质的处理方法很多，聚乙烯吡咯烷酮法分析速度快，效果较好。