GBT19539-2004饲料中赭曲霉毒素A的测定

《GBT19539-2004饲料中赭曲霉毒素A的测定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、(G8中华人民共和国国家标准GB/T19539-2004饲料中储曲霉毒素A的测定DeterminationofochratoxinAinfeeds2004-06-10发布2004-10-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布中国国家标准化管理委员会GB/T19539-2004月明吕本标准中的薄层色谱方法和酶联免疫吸附测定方法主要依据GB/T5009.96-2003《谷物和大豆中赌曲霉毒素A的测定》中薄层色谱方法和卫生部食品卫生监督检验所建立的酶联免疫吸附法。本标准规定以薄层色谱法为仲裁方法，酶联免疫吸附测定法为快

2、速筛选法。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会提出。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会归口。本标准由江苏省微生物研究所负责起草。本标准主要起草人:毖晓黎、袁建兴、李利东、丁贵平、成恒篙。GB/T19539-2004饲料中猪曲霉毒素A的测定范围本标准规定了褚曲霉毒素A(OchratoxinA，以下简称OA)的薄层色谱测定方法和酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于配合饲料、饲用谷物原料中OA的测定。薄层色谱测定方法的最低检测量为2ng,酶联免疫吸附测定方法的最低检测量为0.05ng.2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引

3、用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/丁6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T14699.1饲料采样方法薄层色谱法(仲裁法)3.1原理试样中的OA经提取、液一液分配萃取、浓缩，然后进行薄层分离，限量定量，或用薄层扫描仪测定荧光斑点的荧光强度，外标法定量3.2试荆与材料所用试剂除另有规定，均使用分析纯试剂.水符合GB/T6682中一

4、级水的规定。3.2.1石油醚。3.2.2甲醇溶液(55+45)。3.2.3三氯甲烷。3.2.4苯一冰乙酸(99+1),3.2.540g/L氯化钠溶液。3.2.6无水硫酸钠:650℃灼烧4h，冷却后贮于干燥器中备用。3.2.7展开剂(用时选择一种):a)甲苯一乙酸乙醋一甲酸一水(6十3+1.2+0.06);b)甲苯一乙酸乙酷一甲酸(6十3十1.4);c)苯一冰乙酸(9+L).3.2.8显色剂:碳酸氢钠乙醇溶液(在100ml水中溶解6.0g碳酸氢钠，加20mL乙醇)。3.2.9薄层板:称取4g硅胶G，加约10ml.0.5%拨甲基

5、纤维素钠水溶液于乳钵中研磨至糊状。立即倒人涂布器内制成10cmX20cm,厚度0.3mm的薄层板，在空气中干燥后，用甲醇预展薄层板，除去杂质，吹干，在105℃一110℃活化1h,置于干燥器内保存备用。3.2.10OA标准储备溶液:奋告:1凡接触OA的容器，需漫入4%次抓酸钠(NaOCI)溶液，半夭后清洗备用。2为了安全，分析人员操作时要带上医用乳胶手套。称取适量的OA标准品，用苯一冰乙酸(3.2.4)配制成约10pR/mLOA贮备液。贮备液置于4`C冰GB/T19539-2004箱中避光保存。标定贮备液的浓度，用1cm石英比

6、色杯，以苯一冰乙酸(3.2.4)为参比，在OA的最大吸收峰波长333nm处，测定吸光度值A。储备液中OA的含量(X,)以微克每毫升(pg/mL)表示，按式(1)计算。AXMX100⋯，，..·..。一“..⋯。.⋯，，(1)￡XS式中:A-测定的吸光度值;M-OA的摩尔质量(M=403g/mol);c-OA在苯一冰乙酸中的分子吸收系数(e=555m'/mol;S一~比色杯的光径长度，单位为厘米(cm).3.2.11OA标准工作溶液:根据计算的OA标准储备液的浓度，精密吸取标准储备液(3.2.10)适量，用苯稀释成浓度为1.0

7、ug/mL的标准工作溶液。3.3仪器与设备3.3.1小型粉碎机。3.3.2电动振荡器。3.3.3薄层板涂布器。3.3.4玻璃器皿:分液漏斗、蒸发皿、浓缩瓶。所有玻璃器皿均需用稀盐酸浸泡，依次用自来水、蒸馏水冲洗.3.3.5快速定性滤纸。3.3.6展开槽:250mmX150mmX50mm(立式，具磨口)。3.3.7紫外光灯:波长365nm,3.3.8点样器:1yL-99yL.3.3.9薄层扫描仪:配有汞灯光源。34试样制备按GB/T14699.1饲料采样方法取得试样，四分法浓缩减取约200g，经粉碎，混匀，装人磨口瓶中备用。3

8、.5分析步骤3.5.1试样处理称取约20g试样(3.4)(精确至0.01g),置于200mL具塞锥形瓶中，加30mL石油醚和100mL甲醇溶液(3.2.2)，瓶塞盖紧。振荡30min后，通过快速定性滤纸滤人分液漏斗中，待分层后，放出甲醉水层20mL.置于100mL分液漏斗中，用pH试纸测试