GBT5009.96-2003 谷物和大豆中赭曲霉毒素A的测定.pdf

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1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.96-2003代替GB/T13111-1991谷物和大豆中储曲霉毒素A的测定DeterminationofochratoxinAincerealsandsoybeans2003-08-11发布2004-01-01实施中中华人民共和国卫生部*六国国家标准化管理委员会‘’卜GB/T5009.96-2003前言本标准代替GB/T13111-1991《谷物和大豆中猪曲霉毒素A的测定方法》。本标准与GB/T13111-1991相比主要修改如下:—修改了标准的中文名称，标准中文名称改为《谷物和大豆中赌曲

2、霉毒素A的测定》;—按GB/T20001.4--2001《标准编写规则第4部分:化学分析方法》对原标准的结构进行了修改本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、辽宁省食品卫生监督检验所、黑龙江省食品卫生监督检验所、北京市卫生防疫站、山西省卫生防疫站本标准主要起草人:魏润蕴、鲍风珍、方晓明、杨貌端、高晓岚。原标准于1991年首次发布，本次为第一次修订。GB/T5009.96-2003谷物和大豆中储曲霉毒素A的测定范围本标准规定了谷物和大豆中储曲霉毒素A的薄层色谱测定方法。本标准适用于小麦、玉米和大豆中储曲霉毒素A的测

3、定。本方法的检出限为10u刃kg,规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T5009.22-2003食品中黄曲霉毒素B，的测定原理用三氛甲烷-0.1mol/I磷酸或石油醚一甲醇/水提取试样中的褚曲霉毒素A，试样提取液经液一液分配后，根据其在365nm紫外光灯下产生黄绿色荧光，在薄层色谱板上与标准比较测定含量。4试剂4.1石油

4、醚(60℃一90℃或300C-60'C).4.2甲醇。4.3三氯甲烷。4.4甲苯。4.5乙酸乙醋。4.6甲酸。4.7冰乙酸。4.8乙醚。4.9苯一乙睛(98+2).4.100.1mol/L磷酸[c(H3PO4)二0.1mot/L],称取11.5g磷酸(85功Q水稀释至1000ML4.112mol/L盐酸溶液〔c(HCD=2mol/L]:量取20mL盐酸，加水稀释至120mL4.12氯化钠溶液(40g/L),4.130.1mol/L碳酸氢钠溶液[c(NaHCOO=0.1mol/L]:称取8.4g碳酸氢钠，加适量水溶解，并用水稀释至1000mL.4.14硅胶

5、G:薄层层析用。4.巧储曲霉毒素A标准品(以下简称OA),4.16储曲霉毒素A标准溶液:4.16.1储曲霉毒素A标准贮备液:用苯一冰乙酸(99-1)配成40tg/mL储曲霉毒素A标准贮备液，并用紫外分光光度计测定其浓度。浓度的测定按照GB/T5009.22-2003中3.14(储曲霉毒素A的最大吸收峰波长333nm，分子量403，克分子消光系数值为5550)。置冰箱中避光保存。4.16.2储曲霉毒素A标准使用液:精密吸取贮备液，用苯稀释成每毫升含储曲霉毒素A0.5kg，置冰箱中避光保存。683GB/T5009.96-20035仪器所有玻璃仪器均需用稀盐酸

6、浸泡，用自来水、蒸馏水冲洗。5.1小型粉碎机。5.2电动振荡器。5.3玻璃板:5cmX20cm.5.4薄层涂布器。5.5展开槽:内长25cm,宽6cm、高4cm,5.6紫外光灯:365n,5.7微量注射器:10uL,50pL.5.8具。.2mI尾管的10mL小浓缩瓶。6分析步骤6.1试样的制备称取2509试样经粉碎并通过2。目筛后备用。6.2提取6.2.1甲法称取约20g试样，精确至。.001g，置于200mL具塞锥形瓶中，加人100mL三氯甲烷和10mL0.1mol/L磷酸，振荡30min后通过快速定性滤纸过滤;取20mL滤液置于250mL分液漏斗中，

7、加50mL0.1mol/L碳酸氢钠溶液振摇2min,静置分层后，将三抓甲烷层放人另一个100mL分液漏斗中(少量乳化层，或即使三氯甲烷层全部乳化都可放人分液漏斗中)，加人50mL0.1mol/L碳酸氢钠溶液重复提取三氯甲烷层，静置分层后弃去三氛甲烷层(如三氛甲烷层仍乳化，弃去，不影响结果)。碳酸氢钠水层并人第一个分液漏斗中，加约5.5mL2mol/L盐酸溶液调节pH2--3(用pH试纸测试)，加人25ml，三氯甲烷振摇2min,静置分层后，放三氯甲烷层于另一盛有100mL水的250mL分液漏斗中，酸水层再用10mL三氯甲烷振摇、提取、静置，将三氯甲烷层并

8、人同一分液漏斗中。振摇、静置分层，用脱脂棉擦干分液漏斗下端，放三氯甲烷层于一75