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1、年第期中国饲料蛋白酶和淀粉酶活性检测方法探讨吉林农业大学动物科技学院周景祥王桂芹余涛随着酶制剂在养殖业中应用日益增多,产品碳酸钠溶液精确称取无水碳,,,,。质量也参差不齐市场上时有低劣酶制剂出现而酸钠加去离子水溶解后定容至〕,、一酶制剂酶活的测定比较繁琐有关酶活的定义测值醋酸缓冲液精确取定方法、测定条件尚不统一,给广大用户在选购和玩与浓度为醋酸溶液混,使用时造成很多不便难免上当受骗造成不必要合,用去离子水稀释定容至〕。。·的经济损失本文就蛋白酶中性蛋白酶和酸性酪蛋白底物缓冲液蛋白酶和淀粉酶活力简便、快速测定方法简介如测试酸性蛋白酶缓冲液精确称取酪下蛋白
2、,加人氢氧化钠用去离蛋白酶活力的测定子水配制,在水浴中加热溶解,然后用值一。一。原理采用福林酚试剂法福林酚试醋酸缓冲液定容至以】〕当日配用或置于冰剂在碱性条件下。可被酚类化合物还原呈蓝色钥箱中保存蓝,和钨蓝混合物由于蛋白质分子中有含酚基的测试中性蛋白酶缓冲液精确称取酪、,,,氨基酸如酪氨酸色氨酸等可使蛋白质及其水蛋白置于以〕三角瓶中加人。,解产物呈上述反应因此可利用此原理测定蛋白溶液去离子水配制在沸水浴。,酶活力通常以酪蛋白为底物在一定值和中搅拌使其溶解,冷却后过滤,加人,,温度条件下同酶液反应经一段时间后终止酶促溶液去离子水配制,用去离子,反应经离心
3、或过滤除去酪蛋白等沉淀物后取上以洲,、。水定容至〕毗即成酪蛋白溶液,,一,清液用几碱化再加人福林酚试剂显色。当天配用或置于冰箱中保存蓝色的深浅与滤液中生成产物酪氨酸量成正比丈酪氨酸溶液精确称取,酪氨酸含量用分光光度计在以〕波长处测定酪氨酸,逐步加人盐酸溶解后,用去离。从而计算出蛋白酶的活力子水定容至放人冰箱中保存,临用时用去试剂。离子水稀释倍一刃口福林酚试剂向的磨回流操作步骤瓶中加人钨酸钠·姚、钥酸酪氨酸标准曲线的绘制取支试管分,钠及的去离子水再加人的磷成组每组支,平行样,编号,按表分别加,,酸及浓盐酸充分混合后接上回流冷凝人标准酪氨酸、去离子水、的碳
4、酸钠和,,管以文火回流结束后再加人的硫酸福林一酚试剂,混匀后,放人℃水浴保温、,锉仇去离子水及数滴澳水再继续沸而,然后在型分光光度计上进行比色测定,,腾巧而以驱除过量的澳冷却后滤液呈黄绿色波长日〕,以浓度为拼酪氨酸反应液,,如仍呈绿色需再重复滴加澳水的步骤加去离做。空白对照,,子水定容至《过滤滤液置于棕色试剂瓶样品酶,充活的测定精确称取酶粉,。中贮于冰箱中可长期保存备用此溶液使用时,加去离子水,在分碾细℃水浴中搅拌。,,,。可按比例用去离子水稀释而充分溶出酶蛋白然后过滤留滤液待测三氯乙酸溶液精确称取支试管编号号为,空白对照分别加人酶,〕。,取加去离子水
5、定容至液号管立即加人溶液中国饲料年第期,,、,使酶失活另支样品加人浓度无水磷酸二钠和无水磷酸二氢钾为酪蛋白底物缓冲液如测酸性蛋白酶活力置于约去离子水中,加热至沸腾溶解。称、,,,加酪蛋白底物缓冲液迅速混匀并取可溶性淀粉于一小烧杯中加入去,,,立即放人℃恒温水浴准确计时保温而离子水使其混悬后加人上述沸腾溶液中冷却至,,,后立即加人溶液终止反室温后加人甲醛溶液用去离子水稀,。、应同时向号空白管中加人酪蛋白底释至以此即为酶底物淀粉浓度,,,。物缓冲液摇匀继续置于水浴中保温取为留的缓冲液出离心或过滤除去剩余酪蛋白及酶蛋白沉淀物,碘贮存液称取碘,,,然后取各试管
6、滤液分别移入另支试管酸钾和碘化钾溶于去离子水中再缓慢,,,中再加人碳酸钠溶液和已稀释加人浓盐酸用去离子水稀释至一,,,,,,的福林酚试剂摇匀保温显色后充分混匀贮棕色瓶中每月配制新鲜溶液置冰进行比色测定波长。对照标准曲线,计箱中保存。。碘稀释算酪氨酸含量液取碘贮备液用去,,。表试剂用量离子水稀释倍贮棕色瓶中现用现配,答县标准酪氨酸去离子水、福林一试剂酪氨酸操作步骤称取酶粉充分碾细加去口‘叽酚履田阿方毗少又解,,离子水在℃水中搅拌而充分溶,,。扮出酶蛋白过滤滤液备用按表分别加人底物‘、、,,缓冲液酶滤液碘稀释液和去离子水混匀于印,以去离子水波长处光径调吸光
7、度即,。田为零读各管吸光度蛋白酶活力计算表试剂用二加人物测定管支平行样空白管蛋白酶活力底物缓冲液式中对照标准曲线得出的酪氨酸释放℃预温。,量反应液取出酶粉的稀释倍酶滤液混匀,℃水浴。数反应时间而蛋白酶活性定义在一定碘稀释液礼、值或和℃温度条件下,每分钟去离子水水解酪蛋白产生拌酪氨酸定义为一个蛋白酶淀粉酶活力计算。活力单位一淀粉酶活力一淀粉酶活力的测定测定淀粉酶活力的方法有类,一是测定底式中空白管吸光度测试管吸光度,、一淀粉酶物淀粉的消耗量有粘度法浊度法和碘淀粉比活性定义酶滤液中酶粉的,,,色法等二为生糖法测定产物葡萄糖的生成量酶在℃和底物淀粉作用而水解
8、淀,。。三为色原底物分解法四是酶偶联法其中碘粉为个淀粉酶活性单位淀粉,。比色法测淀粉酶活力操作
