胶原蛋白酶活性的测定方法

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第37卷第ll期中国皮革Vo1．37No．1l2008年6月CHINALEATHERJun．2OO8胶原蛋白酶活性的测定方法李陈料吴琦料陈惠(四川农业大学生命科学与理学院，四川雅安625014)摘要：对胶原蛋白酶的完全酶解标准法、粘滞系数法、Azocoll法、底物干重差量法、CGE—LIF法、茚三酮显色法等6种胶原蛋白酶的活性测定方法进行了综述和讨论。结果显示：茚三酮显色法最为常用。该方法操作简单，测定时间不长，所需要的药品仪器以及测定条件要求简单等。关键词：胶原蛋白酶；测定方法；茚三酮显色法中图分类号TS57文献标识码ADe

2、terminationMethods0fCollagenaseActivityLiChen，W，Chen日(CollegeofLifeScience，SichuanAgriculturalUniversity，Ya’an625014，China)Abstract：Theseveralcollagenaseassaymethodswereintroduced，includingstandardassaymethodofabsoluteenzymolysis，viscometricmethod，Azocollmethod，drysubstrateweightmethod，CGE

3、—LIFmethodandninhydrincolorationmethod．Itshowsthatninhydrincolorationmethodisthecommonusedmethod，withtheadvantagesofsimpleoperation，shortassaytime，simpleassayconditionsetc．Keywords：c0Hagenase；activityassay；ninhydrincol0mti0nmeth0d胶原蛋白是动物细胞合成的一种PaulM．Gallop等(1957)用胶原2粘滞系数法生物高分子，其化学性质稳定，难溶于蛋

4、白酶对胶原进行完全酶解，将产物PaulM．Gallop等还提出了第2种水、稀酸稀碱水溶液及盐溶液。Gallop作为比色标准，用Lowry法测定蛋测定方法。由于鱼胶溶液的黏度与其等将仅可作用于胶原或其变性产物而白。将待测胶原蛋白酶酶解等量底浓度存在如下的关系：=一1，不作用于其他蛋白质的酶类，称为胶物，再测定产物吸光度，便可计算出胶=11／c。(为黏度，c为浓度)。原蛋白酶(collagenase，E．C3．424．30)。原蛋白酶的酶活。该法以鱼胶为酶促他们将底物鱼胶溶液和待酶液一起置胶原蛋白酶可将胶原蛋白降解为有生反应底物，其具体过程为：准确称量于黏度计中，在同样的时间间

5、隔(时间理活性的多肽，而其他蛋白酶则可以8mg鱼胶，溶于2mL含0．005moVL间隔不少于3次)，读取其黏度和浓对多肽继续进行水解，直至成为游离CaC1，，pH值为7．5的缓冲溶液中。度，计算鱼胶的相对黏度。然后以相的氨基酸。胶原的水解产物中含有人37℃振荡预热，然后加入0．5mL酶对黏度为纵坐标，时间为横坐标制作体、动物所需要的19种氨基酸，易于液。振荡反应20min，加入0．5mL半对数曲线，通过改变参加反应的总吸收，在食品、生物医药、美容保健、皮95％的乙醇，终止反应后进行酶活性酶活力数(已知)作出多条试验曲线，革等行业，均具有良好的应用前景。测定。然后取0．1mL

6、稀释成lmL，以曲线的斜率与各总酶活力数之比为一而胶原蛋白酶活性的定量测定，对于没有加酶液的为对照，采用Lowry法该酶的使用至关重要。本文对已报道常数。曲线确定后，斜率随之确定。测定其蛋白含量或多肽含量。对酶活的6种胶原蛋白酶活性的测定方法进通过这种先确定常数然后根据曲线斜力定义为：在以上的测定条件下，降解行了介绍。1mg胶原所需要的胶原蛋白酶的量为率，求得待测样品的总酶活力数。1完全酶解标准法1个酶活力单位。3Azocoll法％本文受四川省教育厅青年基金项目资助料第一作者简介：李陈，男，1982年生，硕士研究生日喇。通讯联系人·24·维普资讯http://www.cqv

7、ip.com第11期李陈等胶原蛋白酶活性的测定方法综述Azocoll为一种特定的底物蛋白，性胶原，30℃水浴10min，加入0．2mL的试剂和药品。因为动物胶原蛋白酶不能被一般的蛋白酶所水解，但能专酶液，30℃水浴30min，再加1mL作用于底物胶原N端3／4出Gly—Leu一性的被胶原蛋白酶和其他少数酶类0．1mol／L的醋酸终止反应。然后测或Gly—Ile肽键，产生一个3／4和1／4所水解。OsamuMatsushita等人在Ka．定水解释放出来的氨基酸。酶活力定的片段分别命名为TCA和TCB，以此meyama