厌氧培养简介标本采集和运送和鉴定

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1、第十五章厌氧菌(anaerobicbacteria)临床微生物学免疫学教研室李闻文2007,9目的要求1.掌握厌氧菌概述2.熟悉检验3.掌握破伤风杆菌和产气荚膜杆菌一、  厌氧菌的概念、形态与分布厌氧菌是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。主要可分为两大类，一类是有芽胞的革蓝阳性梭菌，另一类是无芽胞的革蓝阳性及阴性杆菌与球菌。医院常规方法培养不能检出。抗菌治疗也多无效，是临床上许多疑难杂症。如无菌性感染或脓肿,原因不明的发热。第一节概述某些感染性疾病迁延不愈和反复发作。容易造成感染性疾病漏诊和误诊，由于厌氧培养技术的改进，无

2、芽胞厌氧菌大大多于有芽胞厌氧菌，占90%。厌氧菌分布十分广泛，是体内正常菌群的组成成员，多为条件致病菌。感染遍及临床各科，且多为混合感染。对氨基糖甙类抗生素耐药，而对甲硝唑普遍敏感。1986年，将厌氧菌分31属,245个种和亚种，近20年来新的发现增至40多个菌属，300多个菌种和亚钟，而有芽胞厌氧菌只有一个梭菌属,共130个种。厌氧菌广泛分布于自然界和人体中，梭状芽胞杆菌以芽胞的形式在自然界长期存活。无芽胞厌氧菌存在人和动物体内，口腔，肠道，上呼吸道，尿生殖道。与需氧菌，兼性厌氧菌构成正常菌群。如肠道中厌氧菌占99.9%。如1克大便1000亿个，如

3、大量使用广谱抗生素，机体免疫力下降，进入非正常部位，作为条件致病菌，引起内源性感染。临床意义由厌氧菌感染在人类感染疾病中占相当大的比例，如脑脓肿，牙周脓肿，口腔脓肿80%以上由厌氧菌引起，可以是单独，也可与兼性厌氧菌或需氧菌混合感染。（一）厌氧菌感染的条件组织缺氧或氧化还原电势降低均可造成厌氧菌生长繁殖的适宜环境，易遭受厌氧菌感染，原因很多，如局部组织供血障碍，见于血管损伤，肿瘤压迫，烧伤，动脉硬化，组织水肿，梗死，有异物。大面积烧伤，刺伤亦可。机体免疫功能下降易并发厌氧菌感染，如免疫抑制剂、放疗、化疗。一些慢性疾病导致免疫功能不足或受损易并发厌氧菌

4、感染。如糖尿病患者，慢性肝炎，肾病炎，开放性骨折，各种大型手术，老年人，早产儿。滥用抗生素也是一个方面。厌氧菌进入适当的生长繁殖部位，大量繁殖和损伤组织。坏死组织吸收余氧，进一步降低氧化还原电势，更有利于繁殖，产生内、外毒素，侵袭性酶、酸类、气体及其他毒性产物，造成组织进一步损伤、坏死和全身中毒。在厌氧感染中，大部伴有需氧或兼性厌氧菌感染（二）厌氧菌感染的临床及细菌学特征凡有下列情况者应怀疑有厌氧菌感染1.感染组织局部产生大量气体，造成组织肿胀和坏死，皮下有捻发感，是产气荚膜梭菌感染的特征。2.发生在黏膜附近的感染，如：口腔，肠道，鼻咽腔，阴道有大量

5、厌氧菌感染。如果这些部位及邻近部位破损易发生感染。3.深部外伤或被动物咬伤可能发生厌氧菌感染4．分泌物有恶臭，或为血红色并在紫外光下发出红色荧光，都可能是厌氧菌感染。产黑色素普鲁梭菌和不解糖紫单胞菌其分泌物发红色荧光，放线菌感染的分泌物或脓肿中有硫磺颗粒。5．分泌物镜检阳性，常规培养阴性，或在液体，半固体培养基深部有细菌生长。6．长期应用氨基糖甙类抗生素治疗无效的病例。7．最近有流产史，以及胃肠手术后的感染。第二节厌氧性细菌的检查一、 标本的采集和运送标本的采集和运送是否适当，对厌氧菌培养成功很重要，要注意的二点：一是不能被正常菌群污染，二是不能接触

6、空气。（一）  标本的采集方法应从无正常菌群部位采集标本，无菌操作抽取无菌液体，包括血液，关节液，心包液，胸腹腔液，膀胱穿刺液，深部脓肿，其他组织穿刺液等。在正常情况下厌氧菌可寄生于皮肤和粘膜，不一定是真正的致病菌，下列标本无送检价值，不宜做厌氧培养：（1）鼻咽拭子（2）齿龈拭子（3）痰和气管抽取物（4）胃和肠道内容物，肛拭（5）接近皮肤和黏膜分泌物等。经皮肤粘膜采集标本时，局部消毒，多使用针管抽取，减少与空气接触的机会，抽取时穿刺针头应消毒刺入病变部位，一般抽3~4ml,若病变液体少，先抽取还原液或还原肉汤注入病变部位，再抽取。（二）标本的运送与处

7、理核心问题是避免杂菌污染及空气接触1．针筒运送法主要指液体标本，抽取后排除空气，针尖插入无菌橡皮塞。2．无氧小瓶运送法通常运送少量脓液，用无菌青霉素小瓶作采样瓶，瓶内装培养基及少量指示剂。密封，抽出空气，充以CO2，灭菌备用，再加入标本。3．棉拭运送法少用，用无菌试管装上，试管可加入还原剂培养基密封。4． 大量液体运送法装满密封。5． 组织块运送法组织块放在密封的罐内，并加还原剂。6． 厌氧袋运送法袋经还原剂处理，将平板带到病人床边。标本到达后，应在30min内处理完，最多不超过２小时。如果办不到，应置室温。因低温对厌氧菌有害，而且低温时氧的溶解度高

8、。故每次接种时应观察标本的性状，详细记录。二、检验程序三、检验方法（一）  直接镜检除血液外，各种标本必须在