标本采集、分离培养和鉴定

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1、1.标本采集标本采集应在2小时内用无菌方法采集新鲜标木，置于灭菌容器中或直接接种于增菌培养基中，登记好标本编号和来源送检，如不能及时送检，标木耍存放在专用的标木运送箱内，包扎好以免容器破损。1.1血液应根据病程的不同阶段采集不同标本进行检测，宜在发病早期和抗生素使用前采集。抽取病人3〜5ml血液，立即接种已在室温（＞20°C）平衡的血培养瓶中。推荐采血量为lOmlo所有情况下，接种的标本量必须做好记录。血培养瓶在室温条件下运送至实验室。1.2血清余下的2ml病人血液（作为上述釆集血液程序的一部分）及病后2-3周采集恢复期血液2ml,分离血清做血清学检测（肥达氏试验等）。1.3粪

2、便用无菌采便器采集新排出的粪便约lg直接放入增菌培养管（8・10ml沙门菌增菌液）内，尽快送检。1.4水样标本按《伤寒、副伤寒防治手册》屮所述的方法进行水源标本的采集和分离培养。1.5食品标本固体食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《中华人民共和国国家标准（衣品卫生检验方法微生物学部分）》。注意事项采集标本及标本接收时应认真核对名单及标本号，并作好收样记录（附表2）。2.分离培养2.1血培养血培养瓶放在37°C培养箱里培养10天，每天观察生长情况，如出现混浊现象，应马上转种麦康凯/血平板，即使没有肉眼可见的生

3、长，也必须在1、2、7天转种麦康凯/血平板。2.2粪便培养增菌管37°C培养18〜24小时，挑取培养物转种到SS平板,37°C培养18〜24小时，如果没有观察到有可疑菌落生长，再继续培养24小时，观察结果，挑収可疑菌落。2.3水样标本按《伤寒、副伤寒防治手册》中所述的方法进行水源标本的采集和分离培养。2.4食品标本固休食品需剪碎和研磨，奶和奶制品可直接取样增菌，具体操作见《伤寒、副伤寒防治手册》，所用的培养基及鉴定方法参考《屮华人民共和国国家标准（食品卫生检验方法微生物学部分）》。2.5菌落形态见表lo表1沙门菌属菌落形态沙门菌属大肠杆菌麦康凯平板不发酵乳糖（无色）的光滑型菌落

4、发酵乳糖（粉色）的光滑型菌落SS平板不发酵乳糖、产H2S（中心黑色的无发酵乳糖（粉色）菌落色菌落）或不产H?S1.生化鉴定从每个标木的血培养瓶转种的麦康凯平板挑取3个可疑菌落，粪便培养转种的麦康凯/SS平板挑取3・5个可疑菌落分别转种到以下培养基：1.1KIA：穿刺2/3中段，在斜面上划线。37°C培养18〜24h,观察生化试验结果，挑取KIA生化管上菌苔做革兰氏染色，并做好记录。3.2符合沙门菌KIA反应的，取该管斜面菌苔转种MIU：穿刺接种培养基，并沿穿刺线拔出接种针。西檬氏枸椽酸盐琼脂：在斜面上划线。水生化结果及血清凝集试验符合菌株转种一个营养琼脂平板（药敏实验用）。伤寒

5、副伤寒沙门菌生化特性如表2,表3。菌KIAMIU乳糖葡萄糖h2s斜面颜色中段颜色尿素动力靛基质颜色变化人肠杆菌㊉㊉U黄黄（有气泡）—±+底层不变色加试剂后表层呈卩引味红志贺菌—+—红黄——±底层不变色伤寒菌—+土红黄（无气泡）—+—底层不变色细菌扩散生长甲型副伤寒菌——㊉——红黄（有气泡）——+—同上乙型副伤寒菌—㊉+红黄（有气泡）—+—同上丙型副伤寒菌—㊉+红黄（有气泡）—+—同上㊉产酸产气；土多数阳性，少数阴性；u多数阴性；少数阳性；+产酸不产气;碱性反应为红色；产酸为黄色。1.血清学鉴定取符合伤寒、副伤寒菌生化反应的KIA斜面上菌苔用沙门菌展诊断血清做玻片凝集试验，并设盐

6、水对照，见表4。方法：挑取KIA斜面上菌苔，先用0多价血清凝集，如发生凝集，再选用单价0因子血清凝集（不需煮沸），并用盐水做对照。如果0多价血清不凝集，则用Vi血清鉴定Vi抗原。将细菌制成悬液，经100°C水浴30分钟，破坏其Vi抗原，然后再与O多价和单价血清凝集（先做盐水、O多价、Vi,再做02、04、06.7、09因子血清。）。O抗原确定后，再用H因子血清凝集。不同沙门菌血清型，对O、H及Vi因了血清反应情况如门鸟氨酸脱竣W赖氨酸脱竣酗阿拉伯糖木胶糖卫茅醇枸椽酸盐V—P甲基红冰素靛基质硫化氢蔗糖甘露醇麦芽糖乳糖葡萄糖动力伤寒杆菌++—++甲型副伤寒菌+㊉_㊉㊉乙型副伤寒菌+

7、㊉_㊉㊉丙型副伤寒菌+㊉_㊉㊉+++——一㊉—㊉—+—土㊉㊉㊉++—+㊉㊉㊉+++++注：一阴性（不产酸）；+阳性（产酸）；©产酸产气；±多数阳性，少数阴性;不多数阴性,少数阳性。表4伤寒、副伤寒等沙门菌血清凝集反应菌型O抗原H抗原Vi菌种來源I相Il相伤寒沙门菌9.12d-+人粪、血、脊液、胆汁、肾、穿刺液；猪、蝇、土壤、污水甲副1.2.12a--人粪、血、骨髓、胆汁；猪、污水乙副1.4.5」2b1,2人粪、血、尿、骨髓、胆汁；猪、牛、驴、禽类、蝇、食品、污水丙副6.7c1,5+人粪、血、