巴斯德毕赤酵母高效表达外源蛋白的策略

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维普资讯http://www.cqvip.com海峡药学2007年第19卷第2期巴斯德毕赤酵母高效表达外源蛋白的策略骆诗鸿(厦门特宝生物工程股份有限公司厦门350005)摘要：巴氏毕赤酵母(Pichiapastoris)是表达外源蛋白最理想的真核表达系统之一。要在一种宿主表达系统中成功表达外源蛋白并获得较高产量·必须要较为全面地了解影响其表达的诸多因素。本文综述了应用该体系高效表达外源蛋白需考虑的策略关键词：毕赤酵母；高效表达；策略中图分类号：R92文献标识码：A文章编号：1006—3765(2007)02—000404表达系统是基因工程及生物制药研究和应用的重要内达的各种因素，并阐述了优化外源蛋白在P．pastoris中高效容，也是生命科学研究领域的热点。长期以来，大肠杆菌一直表达的策略。被用作表达外源基因的宿主菌，并成功地表达了多种外源蛋1外源基因的内在特性白，但是它不能表达结构复杂的蛋白质，且分泌型表达产量较主要包括mRNA5’端非翻译区(5’一UTR)、基因的A+低。而哺乳类细胞、昆虫细胞表达系统虽然能够表达结构复杂T组成和密码子的使用频率3个方面。5’一UTR的核苷酸序的真核细胞蛋白成分，但操作复杂，表达水平低，产业化生产列和长度影响外源基因的表达，由于巴斯德毕赤酵母中乙醇造价昂贵，不易普遍推广使用。酵母是单细胞低等真核生物，氧化酶的表达量极高(占胞内可溶蛋白的3O％以上)，极少有它既具有原核生物易于培养、繁殖快、便于基因工程操作和高外源蛋白能达到这么高的水平，因此为了有高的蛋白表达量，密度发酵等特性，同时又具有适于真核生物基因产物正确折维持外源基因mRNA5UTR。尽可能和A0XlmRNA5一叠的细胞内环境和糖链加工系统，还能分泌外源蛋白到培养UTR相似是必需的，最好是保持两者一致。A+T含量高的液中，利于纯化。因此，最近10多年来，酵母被认为是一个很基因在巴斯德毕赤酵母中表达时偶尔会造成转录提前终止，有前途的真核表达系统而受到广泛的关注由于发酵和酿造这是因为AT丰富区可能存在转录提前终止信号。因此对工业的发展，人们对酿酒酵母的遗传背景和生物学特性研究AT含量丰富的基因最好是重新设计序列，使其A+T含量得比较透彻，且其表达的安全性易被接受。因此，酿酒酵母首在3O％～55％范围内。用这种方法使破伤风毒素C片段得到先被用来作为外源基因的表达宿主菌，然而其表达重组蛋白高效表达。Patn等通过对110个酵母基因使用密码子的统计有一定的局限性。基于酿酒酵母的局限性，人们用其他酵母菌学分析，确证了密码子的偏爱性与基因的表达量密切相关。在株构建了可高效稳定表达外源基因的新表达系统，即甲醇营酵母中表达量较高的基因往往采用的是酵母所偏爱的密码养型酵母表达系统。作为第2代酵母表达系统，它克服了酿酒子。赵翔等通过分析巴斯德毕赤酵母的28个蛋白编码基因的酵母表达系统的诸多不足，成为国内外广泛应用的大量生产同义密码子使用情况，计算出该酵母的密码子用法，并确定出外源真核或其他结构较为复杂的原核蛋白的一个较为理想的巴斯德毕赤酵母的19个高表达优越密码子“。表达系统。毕赤酵母是一种单细胞真核生物，近十年来被作为2选择强启动子真核表达系统而用于外源蛋白质的生产，作为一种成功的表P．pastoris载体中最常用的启动子为AOXl启动子，它的达体系，其优点在于：具有强有力的甲醇氧化酶基因(AOXI)甲醇诱导性很强，因此，由它控制的外源基因通常能得到高效启动子，可严格调控外源基因的表达；能高密度发酵培养，而表达。也有人曾用P和Po^s启动子，但二者的强度大大低且营养要求低，利于工业化放大生产；自身分泌的蛋白质非常于P。如果带有外源基因的载体通过双交换整合P．少，使高分泌的外源蛋白质便于纯化；外源基因通过整合型质pastoris的AOX1基因位置时，AOX1基因将被破坏。虽然粒进入毕赤酵母染色体基因组，结构稳定，不易丢失}自身含AOX2和AOX1基因的序列同源性高达97％，但AOX1基因有亚细胞器结构，可对表达的蛋白质进行翻译后的修饰如信表达产物在正常细胞中仅占总酶量的5％。这样就使细胞利号序列的加工；蛋白质的折叠；二硫键形成以及糖基化；基因用甲醇的能力大大下降，从而使表达下降且延长了细胞发酵表达的产物既可在胞内积聚，又可分泌到胞外；外源蛋白质的时间。为了克服这一缺点，戴秀玉等通过分离选择恢复利用表达量较高，如转化酵素2．3g·L_。，牛溶菌酶CO，55g·甲醇能力的自发突变体，从AOX1基因缺陷菌株中分离得到L一。溶栓酶0．08g·LI。，A一淀粉酶2．5g·L一，果胶裂解酶Mut+的自发突变体，他们对突变体的AOX2基因上游区域0．O04g·L一。破伤风毒素片段C12．Og·L～，百日咳抗原经PCR扩增产物测序、确定了该突变体在一255和一529两P693．Og·Lf。，肝炎B表面抗原0．4g·L～，人肝单胺氧化个位置的碱基发生了改变，而这两个位置为阻遏蛋白结合区酶B0．1g·L一。本文综述了影响甲醇酵母中外源基因高效表域。该区域发生点突变后阻遏蛋白便不能很好地与之结合，通过去阻遏作用使得转录效率增强，从而提高表达量和缩短发作者简介：骆诗鸿，男(1979．1O一)。毕业于福建师范大学生物工程学酵时间。。院职称；助理工程师。主要从事生物制药。联系电话；13950055241，3增加外源基因整合拷贝数O592—65l1558外源基因在酵母基因组中的整合数也可以影响外源基因·4· 维普资讯http://www.cqvip.comStraitPharmaceuticalJournalVol19No．22007的表达水平。一般情况下，外源基因整合的拷贝数愈高，蛋白Mut菌中分离Mut自发突变体来使外源蛋白的表达量增表达量愈大，如表达鼠表皮生长因子(mEGF)时，多拷贝产生加。Invitrogen公司提供了KM71和GS115两种宿主菌株，非常高的表达量。目前提高整合拷贝数的方法主要有：(1)通KM71转化子是Mut表型，而GS115转化子主要是Mut表过不同的转化方法提高拷贝数。P．pastoris的转化方法有电激型，也有一小部分是Mut。表型。哪一种表型对外源蛋白的表法、原生质体法、氯化锂法等，其中以原生质法转化使细胞群达量更高，对每一种蛋白而言是不确定的，因此在Mut+菌株中产生多拷贝转化子频率相对较高．但若使用G418检测拷中表达水平较低时，可以尝试用Mut表型来表达。在GSll5贝数，则配合电激法转化的效果更好．(2)在体外载体上多次中表达较低的可以尝试用KM71来表达。插入目的基因片段．但这种多拷贝整合不太稳定且拷贝数有5优化发酵条件限．(3)将载体中目的基因两端连上来自宿主或其它非必需高5．1通气量、温度、pH、甲醇含量和培养时间等发酵条件重复的基因片段，通过同源重组而达到高拷贝整合的目的。由发酵条件主要包括通气量、温度、pH、甲．醇含量和培养时间于rDNA在酵母基因组中有100～200个重复单元，所以这是等。培养基的pH值和温度，对于获得大量蛋白并具有生物活一种提高拷贝的理想方式。。目前要快速高效地筛选高拷贝性非常重要。通常，酵母的生长条件为28～30℃，pH是3．0～的转化子，通过PCR法检测拷贝数既方便又快捷，另外还可8．0，而对于在甲醇诱导启动子AOxl的调控下表达的通过提高G418的浓度来筛选高拷贝转化子。小量摇瓶试验Psclac4，35℃和pH3．5是最适的表达条件。充足的通气量对是筛选转化子简便而有效的方法，但是由于摇瓶培养中巴斯于诱导阶段外源蛋白的表达极其重要，充足的氧气是毕赤酵德毕赤酵母表达外源蛋白的水平往往不能准确反映发酵罐中母高效表达所必需的。VillatleF等的实验显示，等量相同的菌的情况，使之成为令人头疼的问题。主要问题是在摇瓶培养液接种到相同体积的培养基中，由于采用摇瓶形状不同，胆碱中，培养液的pH值无法控制，培养物的通气不充分及无法控酯酶的表达水平可以相差几千倍，但氧饱和度却相差不到两制添加碳源的最适速率，但是为了避免对每一个表达菌株进倍，即使氧气饱和度相同，表达水平仍旧相差甚远㈣。有报道行繁琐的发酵罐培养条件实验，仍需摸索表达菌株的摇瓶培认为，如果用发酵罐进行培养，外源蛋白的表达水平要比普通养。现在发展了一种SCM摇瓶技术(shakencera—micmembrar—摇瓶发酵高出10～100倍“。中科院上海生化所用毕赤酵母leflask)，这种摇瓶技术培养条件比普通摇瓶发酵更接近于发表达的胰岛素前体，在摇瓶发酵时为40mg·L_。，而在IOL酵罐发酵，可以使外源蛋白的表达比普通摇瓶发酵提高2．6的发酵罐中的表达水平是250mg·L-。。郭永志(2000)用毕赤～10倍，因而对重组转化子的筛选更为有效“。然而，并非所酵母表达系统表达重组胰岛素原，发现相同体积的培养液通有高拷贝的转化子都能产生高的表达量，特别在分泌表达时，过发酵罐，外源蛋白的产量比摇瓶中的产量提高5～10倍。主这可能是由于高水平表达阻断分泌途径所致。有时有意增加要原因是普通摇瓶发酵的通气不理想，影响了菌体的高密度拷贝数对表达量并没有什么效果，辛利等在用巴斯德毕赤酵生长及表达。碳源也是影响高水平表达的重要因素。毕赤酵母母表达人血管抑素时发现，拷贝数超过l的菌株表达血管抑表达培养基常用的碳源是甘油，但甘油对AOX启动子有抑素的量要高于单拷贝的菌株，然而拷贝数超过2以后，重组蛋制作用。Thorpe用山梨糖醇代替甘油作为碳源，结果生物质白的表达量并没有明显的增长在极少数情况下，拷贝数的增量下降，但外源蛋白的表达有所提高。。甘油的添加量也影响加反而会导致蛋白产量的下降。巴氏毕赤酵母载体在宿主染到外源蛋白的表达，甘油添加的最适水平应该是在利用甲醇色体上大多数为单拷贝整合，但由于PAoxl在甲醇诱导下的诱导时能够被消耗殆尽。利用甲醇诱导外源蛋白表达，则在诱强启动性以及整合后都很稳定，所以即使单拷贝也能获得较导期间往培养基中补加甲醇，以弥补甲醇的消耗和蒸发。用两高的产量。因此基因拷贝数对表达量的影响是无法预测的。高步法(先用甘油培养使细胞达到一定的浓度，再加甲醇诱导)表达菌株的筛选应以表达蛋白量为唯一标准。和联合生长培养的方法(growth—associated，在早期加人甲醇4载体和宿主的选择诱导)来诱导外源蛋白的表达都有成功的报道，现在一般两步用巴斯德毕赤酵母表达外源蛋白时有多种表达载体可供法来诱导外源蛋白的表达。而Ohashi(1998)的研究证明选择。既有胞内表达的，又有分泌表达的；既有组成性表达的，growth—associated是诱导甲醇酵母高水平表达外源基因的很又有诱导性表达的；分泌表达又有多种表达信号肽可以选择。好方法，比普通方法高出10倍㈣。近几年也有用甘油、甘油一可以根据具体情况选择高表达载体。外源蛋白的表达也受宿甲醇、甲醇的的培养方式，这可以改善酵母菌培养的代谢条主菌遗传特性和生长特性等的影响，比如说，如果外源蛋白对件，缩短诱导期，获得更高的蛋白产出率，但即使加入很低浓蛋白酶敏感，使用蛋白酶缺陷的受体菌可减弱蛋白酶的作用。度的甘油也会抑制外源蛋白的合成，而在诱导期，只加入甲醇转化子的表型对外源蛋白的表达也有影响，一般说来，蛋白胞并随时监测发酵液中甲醇的浓度，可获得更高的产量。“。”。内表达时，优先考虑用Mut。表型；对于分泌表达，Mut和以甲醇作为诱导剂不但可以诱导AOX启动子驱动外源蛋白Mut+都可使用。在高生物量的发酵中，Mut生长更快，较之的表达，也可以诱导蛋白酶的表达，因此甲醇添加量对外源蛋Mut+对于提高外源蛋白的表达量更有效。有时Mut菌株虽白的表达可以产生影响，同时，由于培养条件和转化子表型不然在诱导阶段生长缓慢，但外源蛋白的表达反而更高，更有利同，添加甲醇的量也有所不同。甲醇含量可根据甲醇检测器或于蛋白的正确折叠，如PePTI的表达在Mut。菌株中较高也气相色谱来测，甲醇检测器测量时会受乙醇和其它简单碳氢可以在不改变现有表达载体及宿主菌的前提下，通过从有机物的影响，用气相色谱测量得出的数据较准确。诱导时间·5‘ 维普资讯http://www.cqvip.com海峡药学2007年第19卷第2期也是影响因素之一．诱导时间应该在150h左右，外源基因的pH值．因此低pH不会影响其生长，防止目的蛋白降解。此表达才能达到最高，而有些菌表达时需要诱导200h以上．过外，可通过共表达蛋白酶抑制物来抑制蛋白酶活性，减少目的短的时间(3d)表达量很低，过长的时间外源蛋白的降解增加，蛋白降解；可将目的蛋白与一种在P．pastoris中稳定的蛋白因此寻求一个最佳产量时间比就特别重要。邱荣德(1999)的伴侣融合表达，通过改变目的蛋白的性质来提高稳定性；报道认为，如果用两步法来诱导外源蛋白的表达，则诱导时的也可尝试将目的蛋白连上一个过氧化物酶体靶向信号起始pH可能是毕赤酵母高效表达重组蛋白的关键之一，通(peroxisomaltargetingsigna1．PTS)，使其被分拣转运人过氧化过改变诱导时的pH值，可使表达量提高50以上“”。在培物酶体贮存起来，免受蛋白酶降解，还可减少对宿主细胞的毒养基中添加特殊的营养物质，能提高一些特殊蛋白的表达水害作用n¨¨"。平．如添加限制氨基酸以及表达含有金属的酶时在培养基中随着毕赤酵母表达体系的日益成熟，象rhIL一2、rhGH、人添加金属元素。”。血清蛋白等许多生物制品已在该系统成功表达，但要得到高5．2通过提高菌株的生物密度来提高外源蛋白表达量采表达，使生产工业化，获得高利益，还有一段很长的路要走。用不同的培养基配方和不同的发酵参数，通过提高细胞的绝参考文献对总数来提高外源蛋白的产量。影响P．pastoris生长的外界(13赵翔．霍克克，李育阳，毕赤酵母的密码子用法分析(J3．生物工程因素主要包括：(1)培养基组成。目前主要有BMGY、FBS2种学报，2000．16(3)：3O8～311．(23戴秀玉，王恂．周坚．毕赤氏酵母PAOX2突变化序列分析(J3．培养基可用于培养P．pastoris。但由于BMGY既含有磷酸缓微生物学报，1999，39(6)：559～561．冲液又含蛋白胨和酵母提取物，因而菌株生长更好，大大增加(33聂东宋，梁宋平．李敏．外源蛋白在巴氏毕赤酵母中高效表达的策了生物量，使表达量也相应大大提高。如在表达mEGF时，在略(J3．吉首大学学报(自然科学版)，2001．22(3)：4O～4．BMGY培养基中单拷贝转化子表达量为20gg·L_，而在不[4]OhashiR，MochizukiE，KamoshitaY．High—levelexpressionofthe含蛋白胨和酵母提取物的基本培养基中表达量少于lug·methanol·-induciblebeta·-galactosidasegenebyperfusioncultureofL_。，但YNB价格相对较高，所以工业上用FBS是个不错的recombinantPichiapastorisusingashakenceramicmembraneflask选择。蛋白胨和酵母提取物中几乎不含大分子蛋白质，只有分[J]．JournalofFermentation&Bioengineering，1998，86(1)：44～子量低于3000Da的小分子多肽，因此对于大分子外源蛋白48．的分离纯化不会造成不便。(2)诱导前菌体OD值。P．pastoris[5]VillatteF，HuseinAS，BachmanoTT．Expresionlevelof中蛋白表达分2个阶段：一是生长阶段，在含甘油的培养基培heterologousproteinsinPichiaPastorisisinfluencedbyflask养菌体；二是诱导表达阶段，加入甲醇到培养基中诱导表达。design[J]．ApplMicrobiolBiotechnol2001，55：463～465．一般来说，OD。。值越高，生物量越大，则总的表达量亦应该越[6]WoodMJ，KomivesEA．ProductionoflargequantitiesofisotopicallylabeledproteininPichiaPastorisbyfermentation[J]高．但是OD。。值越高培养基中氧和营养供给越受限制，而且外源蛋白的溶解性、稳定性、毒性都会对菌体产生影响。因此，．JournalofBiomolecularNMR，1999，13(2)：149～159．(73ThorpeED，AnjouMc，DaugulisAJSorbitolasanon-represing高密度并不一定意味着高表达。carbonsourceforfed—batchfermentationofrecombinantPichia5．3防止目的蛋白降解外源蛋白的稳定性直接影响到基pastoric(J3BiotechnologyLetters，1999，21(8)：6O9～672．因表达的产量。几乎没有一种高表达蛋白是特别稳定的，宿主(83OhashiR，MochizukiE，SuzukiT．Amini—scalemassproductionand菌内蛋白酶水平决定着表达产物的降解速度。高密度培养酵separationsystemforsecretoryheterologousproteinsbyperfusion母固然可以大大提高培养基上清中分泌外源蛋白的含量，但cultureofrecombinantPichiapastorisusingashakenceramic随着重组蛋白的分泌增加，其它一些细胞内物质如蛋白酶亦membraneflask[J]JournalofBioscience~Bioengineering，1999，87会分泌增多，在培养基中积累从而造成对重组蛋白的降解，尤(5)：655～660．其是小分子肽更易受到蛋白酶(在中性pH条件下容易产生)(93Helwigs．ErodeLRavenNP，eta1．Analysisofsingle—chainantibody的影响。为了提高外源蛋白在发酵液中的稳定性，免受蛋白酶productioninPichiapastorisusingOn·-linemethanolcontrolinfed·降解，可采有以下几种方法：一．改造P．pastoris表达宿主菌batchandmixed—feedfermentations(J3．BiotechnolBioeng，2001，74(4)：344．株，缺失基因组中主要蛋白水解酶的基因，使目的基因稳定。(IO3lnanM．MeagherMM．Theeffectofethanolandacetateonprotein或使用已有的蛋白酶缺陷菌株如SMDl168，亦可避免产物降expressingCJ3JBioscoiBioeng，2001，92}329·解的发生。二．在培养液中补加一些富含氨基酸的组分和酪蛋(I13邱荣德，朱建蓓，王垒等．人p53蛋白在巴斯德毕赤酵母中的表达白水解物、胃蛋白水解物，或在培养基中加入YP(酵母提取(J3生物工程学报，1999，15(4)：477～481．物+蛋白胨)，提供给酵母细胞蛋白酶过量的底物，以减少目[11]BishtH．ChughDA，SwaminathanS，etalExpressionand的蛋白的降解；例如，有报道在pH6．0的缓冲培养基中加1pudficationofDenguevirustype2envelopeproteinasahepatitis的Casaminoacids可以抑制细胞外蛋白酶，使得鼠表皮生长因BsurfaceantigeninPichiapastori(J3．ProteinExprPurif，2001，子的产量提高。；添加5mMEDTA到培养基中，也可以提高23：84～96．产品的稳定性，但常会使一些不明显的蛋白变成明显的蛋白。[13]PoMerYErardN，MacDonald—ComberPetetotJ．Synthesisof三．毕赤酵母在非缓冲培养基中生长表达，将pH降到3或更polyhydroxyalkanoateintheperoxisomeofPichiapastoris[J]．低，使得许多中性pH蛋白酶失活，由于毕赤酵母能对抗低FEMSMicrobiolLett．2002，207；97～1O2．·6‘ 维普资讯http://www.cqvip.comStraitPharmaceutica1Jo~rna1Vo119No．22007[14]AsimplemethodtomonitorandcontrolmethanolfeedingofPichiaVolume54，Issuel，July2005，Pages8O～85．pastorisfermentationsusingmidIRspectroscopy[J]．ARTICLE[21]Me；MWhittakerandJameswWhittakerConstructionandJournalofBiotechnologyInPress．CorrectedProf，AvailableonlinecharacterizationofPichiapastorisstrainsforlabelingaromaticamino25October2006．JonasSchenk．InnWMarisolandUrsvonacidsinrecombinantproteins?ARTICLEProteinExpressionandStockar．Purification，Volume41，Issue2，June2005，Pages266~274．[15]Corinne,Bebban—Kreuzer．PauleDeprez—Beauclair：AmelieBerton[223Santosh0．Ramchuran，BrunoMateus，0lieHoistandEvaNordbergandIsabelleCrenonHigh—levelexpressionofnonglycosylatedKarlssonThemethylotrophieyeastPichiapastorisasahostforthehumanpancreatictipase-relatedprotein2inPichiapastoris[J]expressionandproductionofthermostablexylanasefromthe．ARTICLEProteinExpressionandPurificationVolume49，IssuebacteriumRhodotherrrlusmarinus?ARTICLEPEMSYeast2．October2006．Pages284～291．Research，Volume5．Issue9，June2005，Pages839～850．[163JunjieEai，OongmeiMa，HaihuaLap，QingJian，XingYe，Jianren[23]MartinMacouzet，BenjaminR．SimpsonandByongBLeeLuo．Xiaoy．ngXong，Yinghua．Molecularcloning，sequencing，Expressionofacold—adaptedfishtrypsininPichiapastoris?expressionofChinesesturgeocystatininyeastPichiapastorisandARTICLEFEMSYeastResearch．Volume5．Issue9，June2005，itsproteinaseinhibitoryactivity?ARTICLEJournalofPages851～857·Biotechnotogy．Volume125，Issue2，1September2006，Pages231[24]WeiZhang，ZhengJianLiandFosterAAgblevorMicrobubble～241．fermentationofrecombinantPichiapastorisforhumanserum[173LiuQing—hui，lluangJie，HanWen—jun，LiangYan，LuChun—lingalbuminproduction?ARTICLEProcessBiochemistry．V0lume40．andWangqing-yinExpression，purificationandcharacterizationofIsue6，May2005，Pages2073~2078．WSSV—VP37inPichiaDastoris?ARTICLEAquaculture，Volume[25]KunishigeKataoka，KazuhiroTanaka，YakoSakaiandTakeshi258．Isues1～4，31August2006，Pages55～62．Sakur8i．High—levelexpresionofMyrotheciumverrucariabilirubin[18]FengliangJin，XiaoxiaXu，LiexiWang，WenqingZhangandoxidaseinPichiapastoris，anditsfacilepurificationandDexiangGuExpresionofrecombinanthybridpeptidececropinAcharacterization?ARTICLEProteinExpresionandPurification，(1—8)一magainin2(1—12)inPichiapastorisPurificationandVolume41。Isuel，May2005，Pages77～83．characterization?ARTICLEProteinExpresionandPurification，[263JohnCrowley．S．AlisonArnold，NigelWood，LindaM．HarveyandInPres，CorrectedProof，Availableonline8July2006．BrianMcNeil．MonitoringahighcelldensityrecombinantPichia[193Ahmnedgloulou，PhilippeGrandval，JosianeDeCaro，MainDeCaropastorlsfed—batchbioprocesusingtransmisionandreflectancenearandFrdddricCarriereConstitutireexpresionofhumanpancreaticinfraredspectroscopy?ARTICLEEnzymeandMicrobiallipase—relatedprotein1inPichiapastoris?ARTICLEProteinTechnology，Volume36，Isues5-6，lApril2005，Pages621~628·ExpresionandPurification．Volume47．Isue2，June2006，Pages[27]LinghuaZhang，ChangxinZhao，WangjingYoshiyukiOhtaand415～421．Yunjiwang．InhibitionofglucoseOilanexoinulinasefrom[203CharlesCLee，TinaGWilliams，Dominiew．S．WongandGeorgeHKluyveromycesmarxianusexpresedinPichiapastoris?ARTICLERobertsonAnePisomalexpressionvectorforscreeningmutantgeneProcesBiochemistry，Volume40，Isue5，April2005，Pages，15411ibrariesinPichiapastoris?SHORTCOMMUNICATIONPlasmid．～1545．红细胞药物载体研究进展柯蒙(福建医科大学附属第一医院药学部福州350005)摘要：目的介绍红细胞作为药物载体的研究和应用现状。方法查阅国内外相关文献，进行分析、归纳和综述。结果对红细胞作为药物栽体特点、制备和应用情况进行综述。结论红细胞作为药物栽体具有广阔应用前景。关键词：红细胞；药物；栽体中图分类号：R969文献标识码：A文章编号：1006—3765(2007)02—007—03红细胞发现于1658年，其主要生理功能为输送0z和用于治疗某些代谢性疾病，并获得成功，开创了用红细胞作为CO以及清除免疫复合物。1973年，lhler等“发现破裂的红载体的先河。之后人们对红细胞作为载体进行大量研究，取得细胞在一定条件下可重封，首次提出将红细胞作为酶的载体了不少成果，如1991年Taylo等。报告以红细胞CR分子作为桥梁，建立了双特异性单抗异聚体清除循环中致病原；1997作者简介：柯蒙，女(1976．12一)。毕业于中国药科大学大学本科；职年，Krantzc提出将药物的效价基团共价可逆交联到红细胞称：药师。从事药品调剂工作。联系电话：O591—87982163·7‘