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《核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、生理学报ActaPhysiologicaSinica,August25,2006,58(4):351-358351http://www.actaps.com.cn研究论文核受体相关因子1表达下调对多巴胺能细胞酪氨酸羟化酶和神经突起生长的影响吴云成1，蔡友庆2，赵永波1,*，费俭21上海市第一人民医院神经内科、临床神经生化研究室，上海200080；2中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海200031摘要：将合成的核受体相关因子1(nuclearreceptor-relatedfactor1,Nurr1)特异性短发夹寡核苷酸(small-hairpinRNA,shR
2、NA)序列插入真核表达载体pSilenCircle(pSC)，构建Nurr1基因特异性shRNA真核表达载体，转染体外培养多巴胺能神经前体细胞系MN9D，分别采用实时荧光定量PCR和Westernblot方法检测其对MN9D细胞内源Nurr1的干扰作用及其对酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH)表达的影响，并在倒置显微镜下观察MN9D细胞神经突起生长的情况，探讨Nurr1shRNA表达载体对多巴胺能细胞表型标记物TH和以神经突起延长为特征的细胞成熟的影响。结果表明，脂质体组细胞和转染阴性对照质粒的MN9D细胞内Nurr1、TH的表达正常，而转染Nurr1shRN
3、A真核表达载体(pSC-N1和pSC-N2)的MN9D细胞内Nurr1和TH的mRNA水平明显降低，Nurr1mRNA的下降率分别为62.3%和45.6%，THmRNA的下降率分别为76.3%和62.6%。同时Nurr1和TH蛋白的表达亦明显下调，Nurr1蛋白的下降率分别为57.4%和72.0%，TH蛋白的下降率分别为79.1%和70.1%。另外，转染Nurr1shRNA真核表达质粒的MN9D细胞神经突起延长有所减少，但是与正常细胞无明显差异。结果提示：Nurr1shRNA真核表达载体能显著下调MN9D细胞内源Nurr1和THmRNA和蛋白的表达，同时可能对MN9D细胞的神经突起延
4、长有一定的抑制作用。Nurr1shRNA表达载体的成功构建为多巴胺能神经元发育以及帕金森病相关基因的功能研究奠定了基础。关键词：核受体相关因子1；酪氨酸羟化酶；RNA干扰；帕金森病；发育；神经突起中图分类号：Q421；Q344+.13EffectsofNurr1down-regulationontheexpressionoftyrosinehydroxylaseandneuriteextensionindopaminergiccellsWUYun-Cheng1,CAIYou-Qing2,ZHAOYong-Bo1,*,FEIJian21DepartmentofNeurology,Sha
5、nghaiFirstPeople’sHospital,Shanghai200080,China;2InstituteofBiochemistryandCellBiology,ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences,ChineseAcademyofSciences,Shanghai200031,ChinaAbstract:Intheexperiment,wedesignedandsynthesizedtwosiRNAsbasedonthesequenceofnuclearreceptor-relatedfactor1(Nurr1)mRNA.The
6、ywereseparatelysubclonedintotheplasmidofpSilenCircle(pSC)containingU6promoter.ThepSC-Nurr1vectors(pSC-N1andpSC-N2)specifictoNurr1geneandthenegativecontrolvectorofshort-hairpinRNA(shRNA)eukaryoticexpressionvectorTMwereconstructed.WeculturedthedopaminergiccelllineMN9Dandtheverifiedvectorsweretran
7、sfectedwithLipofectamine2000invitro.ThepositivecellclonestransfectedwithpSCwereobtainedafterbeingscreenedwith500µg/mlG418.Afterthat,thesilencingeffectsofNurr1andTHmRNAorproteinweredetectedbyrealtimeRT-PCRandWesternblot.Theneuritee
